[發明專利]水稻花粉母細胞特異性表達基因

無效

• 申請號: 201010174874.0
• 申請日: 2010-05-14
• 公開（公告）號: CN102242113A
• 公開（公告）日: 2011-11-16
• 發明（設計）人: 唐威華;張棟;湯湘;趙仕蘭
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海生命科學研究院
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12N15/29;C12N15/113;C12N5/04
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

1.一種篩選水稻花粉母細胞特異性表達基因的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)利用激光捕獲顯微切割從水稻未成熟花序的切片中分離出花粉母細胞；

(2)對花粉母細胞進行表達譜分析，并與處于有絲分裂時期的三核花粉和/或幼苗的表達譜進行比較，找出特異性在花粉母細胞中表達而不在三核花粉和/或幼苗中表達的基因，所述基因即是水稻花粉母細胞特異性表達基因。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的水稻未成熟花序是水稻發育時期第5期的未成熟花序。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，水稻未成熟花序的切片如下制備：將水稻未成熟花序進行固定、石蠟包埋、切片、脫蠟、干燥，得到用于分離水稻母細胞的水稻未成熟花序的切片。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)包括：在水稻未成熟花序的切片中將花粉母細胞標記出來，用紫外激光束將花粉母細胞與周圍細胞分開，收集花粉母細胞。

5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，包括：

將水稻未成熟花序的切片置于激光捕獲顯微切割儀器中，從放大的顯微圖中辨別出處于花藥室中的花粉母細胞/小孢子，并將部分切片分別通過染色確定花粉母細胞位置用作參照；根據參照將同批未經染色的幼嫩花藥橫切片在激光捕獲顯微切割儀顯示屏上花粉母細胞標記出來，經過焦距和能量的精細調整后，用紫外激光束將花粉母細胞與周圍細胞分開，再用近紅外激光束收集花粉母細胞。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)包括：

(a)對花粉母細胞進行RNA抽提，獲得總RNA；線性擴增總RNA，得到氨基-烯丙基cRNA；

(b)以熒光染料Cy3-，Cy5-偶聯花粉母細胞的氨基-烯丙基cRNA，用于與水稻基因組芯片雜交，分析表達譜；將該表達譜與三核花粉和/或幼苗經相同處理得到的表達譜比較，建立基于雜交信號絕對值的芯片數據分析方法，結合生物統計學找出可重復性地在花粉母細胞中顯著表達而不在三核花粉和/或幼苗中表達的基因，所述基因即是水稻花粉母細胞特異性表達基因。

7.一種權利要求1所述的方法篩選獲得的水稻花粉母細胞特異性表達基因。

8.一種啟動子，其指導基因在水稻花粉母細胞中特異性表達。

9.一種收集花粉母細胞群落的方法，其特征在于，所述方法包括：利用激光捕獲顯微切割從水稻未成熟花序的切片中分離出花粉母細胞。

10.如權利要求9所述的方法，其特征在于，所述方法包括：在水稻未成熟花序的切片中將花粉母細胞標記出來，用紫外激光束將花粉母細胞與周圍細胞分開，收集花粉母細胞。