[發明專利]流體轉移控制

在審

• 申請號: 201010161878.5
• 申請日: 2010-04-08
• 公開（公告）號: CN101857898A
• 公開（公告）日: 2010-10-13
• 發明（設計）人: M·霍拉特;G·薩格納
• 申請（專利權）人: 霍夫曼-拉羅奇有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李志東;付磊

發明領域

本發明涉及流體轉移控制方法，所述方法基于對待轉移流體內染料強度的測量。更具體而言，本發明利用控制染料和猝滅劑分子用于流體轉移控制。

發明背景

對于試驗的準備而言，多數情況下需要將幾種流體試劑混合，對所述試驗的重現性結果而言，轉移經控制體積的每一種試劑和樣品是重要的。因為所有的流體轉移過程均具有某一變動(variance)，因此轉移誤差不可避免，但至少它必須可能檢測那些具有不可接受誤差的轉移過程，以便忽略這些試驗的結果。

特別地，實時PCR系統要求所有反應組分的精確混合物用于可信的且可比較的定量，因為實時PCR所要求的樣品材料、引物/探針以及主混合物(Master?mixes)的量顯著地影響定量結果。但是當然，其他試驗也要求具有混合幾種組分的裝置，且所述裝置的體積轉移控制也是重要的。

為了解決這些不確定性，標準化(normalization)技術可以使用，主要建立了兩種不同的標準化方法用于定量實時PCR(qPCR)：

(1)為了針對樣品材料(DNA或RNA)的差異進行標準化，將未調節的參照基因與靶基因組合測量，并計算靶基因/參照基因的比值(相對定量方法參見例如LightCycler?480操作者手冊，179ff頁)。

(2)為了針對熒光強度的差異進行標準化，加入參照染料(不參加qPCR反應)，并將所有測量的熒光數值針對參照染料熒光進行標準化(應用生命系統公司(Applied?Biosystems)，ROX參照染料，US?5,736,333)。

但這兩種標準化方法均呈現一些問題。當應用相對定量而不是使用絕對定量時，標準化方法(1)只能控制樣品材料的量/質量(amount/quality)。此外，該方法不能控制除樣品材料外的任何其他PCR組分的量。標準化方法(2)只能針對由qPCR系統變動生成的熒光強度差異進行標準化。當某一組分的量低于某一限度時，它不能控制或警告使用者。

目前，沒有本領域已知的對待混合用于試驗裝置的組分體積提供控制系統的流體轉移控制系統。

本發明提供了用于試驗裝置的封閉系統，其包括鑒定混合用于所述試驗的組分體積誤差的控制策略。依照本發明的方法特別適用于實時PCR擴增的裝置。

發明概述

本發明的一個方面是流體轉移控制方法，該方法包括

a)提供含控制染料的待轉移溶液，

b)將預定體積的包含一定濃度所述控制染料的所述溶液轉移至復數個容器中，

c)測量各個容器內控制染料的強度，

d)將步驟c)中對各個容器測量的強度與預定閾值進行比較，如果步驟c)中測量的強度低于所述預定閾值，則對某一容器檢測到流體轉移誤差，

e)對步驟c)中測量的強度高于所述預定閾值的所有容器編譯平均強度數值，

f)對步驟c)中測量的強度高于所述預定閾值的所有容器進行檢驗，如果所述強度落在步驟e)中編譯的所述平均強度數值周圍的預定范圍之內，其中如果步驟c)中測量的強度未落在所述范圍之內，則對某一容器檢測到流體轉移誤差，以及

g)對步驟c)中測量的強度落在步驟f)中的所述預定范圍之內的所有容器宣布為正確的流體轉移。

本發明通篇的“溶液”被用作需要被轉移至容器用于在所述容器中的隨后反應的所有種類液體組分的總稱，其中所述反應可能需要向所述容器中加入額外的組分。當然，依照本發明的方法可應用于需要在所述反應之前進行的每一個轉移步驟。如果超過一種溶液被轉移至一個反應容器，每一種所述溶液可與不同的、有區別的染料混合。備選地，每一種溶液可含有相同的染料，且每一步驟之后強度的變化可用于轉移控制。

本發明通篇的控制染料被用作轉移控制。控制染料的存在可使用適宜機械測量，所述適宜機械取決于所使用的染料，例如用于光學染料的PMTs或CCD芯片或在放射性染料情況中的閃爍計數器。

所測量的強度通過軟件模塊進行處理，所述軟件模塊將經計算的數值與某些閾值(例如，最小熒光，與平均數值的偏差的范圍)進行比較。該軟件模塊生成輸出信號(a)提示使用者某一容器未通過轉移控制檢查(“軟關閉”)或(b)抑制未通過轉移控制的容器的結果計算(“硬關閉”)。此外，該軟件模塊可用于避免具有檢測到的轉移誤差的容器的進一步處理。