[發明專利]一種細菌多糖-蛋白結合疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 201010144723.0
• 申請日: 2010-04-12
• 公開（公告）號: CN101972475A
• 公開（公告）日: 2011-02-16
• 發明（設計）人: 李建平
• 申請（專利權）人: 李建平
• 主分類號: A61K39/295
• 分類號: A61K39/295;A61K39/15;A61K39/09;A61K39/102;A61K39/095;A61K39/108;A61K39/112;A61K39/106;A61K39/39;A61P31/04;A61P31/14;C12N15/46;C12N15/70
• 代理公司: 北京元中知識產權代理有限責任公司 11223
• 代理人: 王明霞

技術領域

本發明涉及一種具有免疫原性的細菌多糖-蛋白結合疫苗，具體講，涉及一種采用輪狀病毒蛋白與細菌多糖共價鍵連接的結合疫苗。

背景技術

通過接種疫苗來預防疾病是人類在一個多世紀的臨床實踐中，證明是行之有效的手段。經過多年的努力，醫學界已經開發出各種不同的疫苗用以預防，諸如細菌、病毒和真菌等，感染造成的各種疾病，極大地提高了人類的健康水平。生物技術的不斷發展，促進了疫苗品種的多樣化。今天，用以預防病毒導致的傳染病有滅活病毒技術開發出來的疫苗，如乙腦疫苗、脊髓灰質炎疫苗、流感疫苗等；用減毒病毒技術開發出來的減毒活疫苗，如輪狀病毒疫苗、口服脊髓灰質炎病毒疫苗、麻疹病毒疫苗、腮腺炎病毒疫苗、風疹病毒疫苗和水痘疫苗等。預防細菌性傳染病的有用蛋白和多糖等生物大分子純化技術開發出來的細菌類疫苗，如破傷風類毒素、白喉類毒素、百日咳類毒素及其亞細胞組分、流行性腦膜炎球菌多糖和23價肺炎球菌多糖等。用基因重組蛋白技術開發出來的疫苗，如乙肝表面抗原(預防乙型肝炎)、人類乳頭狀類病毒顆粒病毒(預防子宮頸癌)等。用半化學結合技術開發出來的預防腦膜炎和肺炎的細菌疫苗，如流行性嗜血桿菌b型多糖-蛋白結合疫苗、7價或10價肺炎球菌多糖-蛋白結合疫苗以及4價腦膜炎球菌多糖-蛋白結合疫苗。由此可見，醫學生物技術的發展，是疫苗產品不斷發展的原動力，通過對生物技術的不斷改進，能夠開發出更多的新型疫苗產品來應付不同的傳染病對人類健康的挑戰。

細菌感染仍然是兒童的主要殺手，尤其是發展中國家，每年有數百萬的兒童因患傳染病而死亡，其中最常見的病原體有肺炎球菌、流行性嗜血桿菌b型、奈瑟氏腦膜炎球菌、沙門氏傷寒桿菌、金黃色葡萄球菌和引起腹瀉的痢疾桿菌、沙門氏菌和霍亂弧菌等。

從化學結構上來看，以上每一個病原體都擁有一個細胞表面莢膜多糖(Capsular?polysaccharide，CPS)或脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)殼，或者兩者兼有，其功能是幫助病原體感染宿主。莢膜多糖能夠屏蔽細菌細胞表面功能成分免于被宿主免疫系統識別，防止補體系統被細菌表面蛋白激活和免疫細胞吞噬，如果細菌被吞噬，莢膜多糖能夠防止細菌被殺滅。大多數病原菌中，不同的菌株表達不同結構的莢膜多糖和脂多糖，產生多種不同的血清型菌株。流行性嗜血桿菌絕大多數是由b型一種血清型引起，肺炎球菌所致的肺炎和腦膜炎是由已知的90種血清型中的很大一部分菌株感染所導致的，腦膜炎球菌造成的腦膜炎則主要是A、B和C群細菌感染引起，盡管W135和Y型也開始出現。由此可見，大多數細菌多糖類疫苗必需含有多種不同種類的細菌多糖以提高致病菌株覆蓋率，優化和選擇包含何種細菌或者血清型多糖在疫苗中是一個非常復雜的流行病學問題。一旦明確何種多糖抗體具有保護作用，則可用這種多糖作為免疫原來生產疫苗。臨床使用證明，莢膜多糖制作的疫苗明確有效，并在多個國家廣泛使用。但是這類疫苗有幾個缺陷，第一，具有重復結構的多糖是T細胞獨立型2類的免疫原，沒有T細胞的參與，它們是無法誘導免疫記憶效應，刺激機體產生的抗體主要是IgM和IgG2，不能夠有效地激活補體系統；第二，更重要的是這種疫苗不能夠誘導年齡小于2歲的嬰幼兒產生免疫應答來預防疾病，而這一人群正是免疫系統發育不完善，容易患傳染病的高危人群。

莢膜多糖和脂多糖的O-特異性多糖具有嚴格的重復性化學結構，這個化學結構可由一個單糖單位或含有最多達7-8單糖殘基形成的寡聚糖組成。這種重復性單位可為線性或含有非碳水化合物取代基團的分叉結構，這些非碳水化合物取代基團可為O-乙酰基(O-acetyl)、甘油磷酸(glycerol?phosphate)或丙酮酸(pyruvate)。細菌多糖可能含有不常見的單糖殘基，如二氨基(diamino-)，脫氧和分叉鏈糖等。總的來說，莢膜多糖傾向于帶負電，而O-特異性寡聚糖為中性。試驗表明，相對少量高親和力的直接針對多糖主鏈結構的抗體在免疫學上最為重要。