[發明專利]一種提高豬圓環病毒2型全病毒滅活疫苗抗原量的方法

無效

• 申請號: 201010138882.X
• 申請日: 2010-04-02
• 公開（公告）號: CN102210857A
• 公開（公告）日: 2011-10-12
• 發明（設計）人: 李郁;魏建忠;蘇金存;孫裴;王桂軍
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;A61P31/20;C12N7/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種提高豬圓環病毒2型全病毒滅活疫苗抗原量的方法，具體地說是將豬圓環病毒2型細胞培養滅活物經初效過濾、中效過濾和高效過濾三個階段，達到濃縮提高全病毒滅活疫苗抗原量的制作方法。

背景技術

豬圓環病毒2型(PCV2)是引起豬圓環病毒病(PCVD)的病原，包括豬斷奶后多系統衰竭綜合征(PMWS)、豬皮炎-腎病綜合征(PDNS)、豬增生性壞死性肺炎(PNP)、豬先天性腦震顫(CT)、豬的流產與繁殖障礙等。目前，PCVD在我國的陽性率呈逐年上升的趨勢，具有流行范圍廣、各生長階段豬感染嚴重、保育豬發病率最高、混合感染突出等特點，嚴重威脅了我國養豬業的發展。

PCV2疫苗的免疫能夠提供很好的保護，而且效果明顯，得到普遍認可，如明顯降低死亡率、減少死淘率、提高生產成績、降低藥物治療費用等。然而，在PCV2疫苗的研制過程中，遇到的主要問題是：該病毒體外增殖能力差，培養物病毒含量低，病毒接種細胞不產生病變，病毒含量不易測定，病毒感染動物臨床反應不一，免疫力評價困難。其中提高疫苗的抗原量是PCV2疫苗生產和應用的瓶頸，因此業內人士提出，通過馴化和篩選適應PCV2生長的細胞系、建立高密度培養技術等可望解決此類問題。但迄今為止，尚未見到相關成功的報道。

目前，已有二件PCV2全病毒滅活疫苗獲得中國專利(CN200810024423.1和CN200810079560.5)。前者采用了PCV2上海分離株SH，在PK-15細胞中大量增殖，經甲醛滅活加入白油佐劑進行乳化，制備常規的白油佐劑疫苗；故其疫苗抗原量提高受到限制。后者系從典型PCV2病豬體內分離出臟器組織，經研磨、過濾得到臟器組織提取物，加入甲醛滅活，以生理鹽水稀釋制成原始滅活疫苗，將該疫苗接種到健康豬體內促其發病或死亡后，采集臟器組織，經研磨、過濾，加入甲醛滅活，以生理鹽水稀釋制成PCV2滅活疫苗；故其疫苗抗原量確定困難、制備成本增高。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供一種濃縮提高PCV2全病毒滅活疫苗抗原量的制作方法。

實現上述目的具體技術解決方案如下：

1、一種提高PCV2全病毒滅活疫苗抗原量的制作方法，包括PK-15細胞增殖PCV2培養滅活液取得、初效過濾、中效過濾、高效過濾。

2、根據上述1所述提高PCV2全病毒滅活疫苗抗原量的制作方法，具體步驟和條件如下：

(1)PK-15細胞增殖PCV2培養滅活液取得

在利用間接免疫熒光檢測PK-15細胞增殖PCV2培養液TCID50之后，經終濃度0.1％甲醛37℃滅活30h。

(2)初效過濾

利用4層無菌紗布初步過濾PCV2細胞培養滅活液。其目的在于除去細胞培養物中大的顆粒雜質。

(3)中效過濾

將初效過濾液通過100KD的中空纖維超濾膜組件。其目的在于除去大分子量的蛋白質。

(4)高效過濾

將中效過濾液再通過6KD的中空纖維超濾膜組件。其目的在于濃縮全病毒抗原，可達10倍濃縮。

本發明的制作工藝簡單、工藝穩定、易調控、成功率高。本發明方法的生產投資少，且無三廢問題。本發明的制作方法適合工業化生產，不受時間、地點的局限，可為大中型獸醫生物制品生產企業采用。

本發明通過將PCV2細胞培養滅活物經初效過濾→中效過濾→高效過濾三個階段，達到10倍濃縮全病毒滅活疫苗的抗原量，這在當前尚未馴化篩選出適應PCV2生長的細胞系、實現建立高密度培養技術的情況下，本發明的制作方法無疑為PCV2全病毒滅活疫苗抗原量的提高提供了條件，從而為PCV2全病毒滅活疫苗的優質生產奠定了基礎。

本發明方法濃縮提高PCV2全病毒滅活疫苗的抗原量具有獨特的先進性：一、所用材料易得，所需設施簡便。二、制作程序簡單，生產成本低廉。三、濃縮比率高，且對經濃縮的PCV2抗原特性無任何影響。四、增強了疫苗的免疫效力，且無三廢問題，具有社會和經濟雙重效益。

具體實施方式

結合實施例對本發明作進一步地描述。

實施例：

該濃縮提高PCV2全病毒滅活疫苗抗原量的制作方法，包括下述制作工序：

1、PK-15細胞增殖PCV2培養滅活液取得