[發(fā)明專利]黃單胞菌、制備方法及其生產(chǎn)耐溫型黃原膠多糖的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010132122.8
• 申請日: 2010-03-25
• 公開（公告）號: CN101906390A
• 公開（公告）日: 2010-12-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王新綱;司書鋒;孫正艷;陳健
• 申請（專利權(quán)）人: 淄博中軒生化有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N15/01;C12N13/00;C12P19/06;C12R1/64
• 代理公司: 濟(jì)南舜源專利事務(wù)所有限公司 37205
• 代理人: 宋玉霞

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種黃單胞菌，特別涉及一種黃單胞菌Xanthomonas?sp.S-96#、制備方法及用其生產(chǎn)耐溫型黃原膠多糖的方法。

背景技術(shù)

由于微生物發(fā)酵多糖的流變學(xué)特性、耐鹽性能、增稠效果，使其應(yīng)用于油田開發(fā)方面較之聚丙烯酰胺、CMC、變性淀粉及一些多糖植物（瓜爾膠等）有明顯的技術(shù)優(yōu)勢。其中黃原膠是由黃單胞菌以碳水化合物為主要原料,經(jīng)發(fā)酵工程生產(chǎn)的一種作用廣泛的微生物胞外多糖，而它作為一種卓越的油田鉆井泥漿添加劑，它的應(yīng)用被稱為70年代泥漿技術(shù)的最新成就之一，其所獨有的在低剪切情況下的高粘度，使低濃度的鉆井液可以懸浮固體物質(zhì)，即使在一定的高濃度酸堿鹽溶液中仍保持其性能，這一點尤其在海洋鉆井或其他苛刻條件下更為重要，適用于三次采油和提高采率法采油，在美國和西歐，約有30%～40%的黃原膠用于鉆井泥漿和三次采油。在近幾年發(fā)展起來的“聚合物驅(qū)油”新技術(shù)中，黃原膠用量占聚合物的30%～40%左右，但由于現(xiàn)有黃單胞菌菌種耐溫性能差，生產(chǎn)的一些黃原膠產(chǎn)品在高溫下粘度下降較快，影響了在某些方面的應(yīng)用，并且現(xiàn)有以黃原膠為主的生物多糖產(chǎn)品也普遍存在水溶液粘度不穩(wěn)定，在高溫條件下產(chǎn)品質(zhì)量下降等問題，因此開發(fā)一種耐溫型黃單胞菌菌種及生產(chǎn)耐高溫的微生物多糖就顯得非常重要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的就是針對上述存在的缺陷而提供一種黃單胞菌Xanthomonas?sp.S-96#、制備方法及用其生產(chǎn)耐溫型黃原膠多糖的方法，菌種耐溫性能好，生產(chǎn)出的黃原膠多糖產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，加熱后產(chǎn)品粘度相比類似產(chǎn)品明顯升高，應(yīng)用指標(biāo)優(yōu)越，并改善了原有類似產(chǎn)品生產(chǎn)工藝，生產(chǎn)過程安全，可代替現(xiàn)有黃原膠產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于石油開發(fā)等對高溫條件下粘度要求較高的行業(yè)。

目前該黃單胞菌在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，郵編：100101，其保藏編號是：CGMCCNo.3624，菌種的拉丁文名稱是Xanthomonas?sp.，參據(jù)的微生物（株）：S-96#，保藏日期是2010年02月01日。

本發(fā)明所述的黃單胞菌菌株特征為：在蔗糖瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)本菌株三天后觀察，可形成飽滿、表面光滑、粘稠的黃色菌落，液體搖瓶培養(yǎng)三天可形成黃色粘稠的膠狀物質(zhì)；菌株顯微鏡下鏡檢呈桿狀，有莢膜；革蘭氏染色陰性；能夠利用蔗糖，葡萄糖，淀粉水解液作為碳源。

上述黃單胞菌的制備方法，包括黃單胞菌菌懸液的制備、亞硝基胍誘變、紫外線誘變、搖瓶篩選步驟，挑選發(fā)酵液粘度較高，耐溫性能好的菌落，分離上述黃單胞菌。

上述黃單胞菌的制備方法，其詳細(xì)步驟為：

①.?黃單胞菌菌懸液的制備：

將黃單胞菌接種于種子搖瓶中，在28±1℃的條件下，振蕩培養(yǎng)18-24小時，，將種子液多次離心并用緩沖液洗滌后制成菌懸液，其中種子培養(yǎng)基各組分按重量配比為：蔗糖0.8-1.2%?，牛肉膏0.2-0.5%，酵母粉0.3-0.8%，調(diào)節(jié)PH到7.0±0.2；

②.?亞硝基胍誘變

在菌懸液中加入溶解好的亞硝基胍處理1-1.5小時，將處理過的菌懸液多次離心洗滌后稀釋涂布于平板上，36-38℃條件下培養(yǎng)三天；

③．紫外線誘變

挑取亞硝基胍誘變后生長健壯、良好的菌落，搖瓶培養(yǎng)后再制成菌懸液，吸取5-8ml菌懸液置于帶有磁力攪拌器的直徑6cm的平板上，在暗光下用15W的紫外燈照射10-12min，然后涂布于培養(yǎng)皿上，在暗光下36-38℃培養(yǎng)三天；

④．搖瓶篩選

挑選紫外燈誘變后培養(yǎng)皿上健壯飽滿、濕潤的大菌落進(jìn)行發(fā)酵搖瓶篩選，發(fā)酵搖瓶配方：蔗糖3.5-4.0%，大豆蛋白0.5-0.8%?，CaCO3?0.2-0.3%,余量為水，調(diào)節(jié)PH到7.0±0.2；

經(jīng)多次傳代后挑選粘度較高，菌苔豐滿，濕潤，有光澤，無不規(guī)則菌苔生成的菌落，分離出上述黃單胞菌。

所述的黃單胞菌生產(chǎn)耐溫型黃原膠多糖的方法，包括以下步驟：

(1)種子擴(kuò)大培養(yǎng)：

①.一級種子罐：

將種子培養(yǎng)基各組分按配比依次投入加好水的一級種子罐中，攪拌均勻使其溶解，采用實消；降溫后，由接種口按0.8-1.2%的比例接入本發(fā)明的菌種，當(dāng)菌體數(shù)量較多，生長飽滿時轉(zhuǎn)種；

②.二級種子罐：

將種子培養(yǎng)基各組分按配比依次投入加好水的二級種子罐中，攪拌均勻使其溶解，采用實消；降溫后，將無雜菌的一級種子罐中的種液按1：10比例壓入二級種子罐中，當(dāng)菌體數(shù)量較多，生長飽滿時轉(zhuǎn)種；