[發(fā)明專利]牙鲆抗病優(yōu)良品系選育方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010128852.0
• 申請(qǐng)日: 2010-03-18
• 公開（公告）號(hào): CN101911918A
• 公開（公告）日: 2010-12-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳松林;田永勝;徐田軍;王磊;鄧寒;畢金貞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所
• 主分類號(hào): A01K61/00
• 分類號(hào): A01K61/00;C12N5/076;C12N5/0735
• 代理公司: 青島海昊知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所有限公司 37201
• 代理人: 張中南

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的魚類遺傳育種領(lǐng)域，特別涉及一種牙鲆抗病優(yōu)良品系選育方法。

背景技術(shù)

魚類是重要的水產(chǎn)養(yǎng)殖種類，也是人類重要的食品來源。我國(guó)是世界上水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)量最高的國(guó)家，目前養(yǎng)殖魚類的年產(chǎn)量達(dá)到2000多萬(wàn)噸，除滿足國(guó)內(nèi)市場(chǎng)外，每年約有30萬(wàn)噸魚產(chǎn)品出口國(guó)外，是出口創(chuàng)匯的主要農(nóng)產(chǎn)品之一。不過，近年來隨著魚類養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，病害頻發(fā)、種質(zhì)退化、苗種成活率低，給魚類養(yǎng)殖業(yè)造成的經(jīng)濟(jì)損失每年高達(dá)150多億元人民幣，從而極大地限制了魚類養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。

目前危害魚類的主要病害是細(xì)菌性和病毒性疾病，前者造成的危害更大，其中危害最大的一種細(xì)菌性疾病，是由鰻弧菌引起的弧菌病(周麗等，1997)。雖采取抗菌素類藥物等傳統(tǒng)的防病措施，但仍無(wú)法從根本上解決牙鲆等魚類養(yǎng)殖的病害問題；并且抗菌素類藥物具有容易在魚體內(nèi)積累、對(duì)消費(fèi)者的健康具有潛在危害、容易使病原菌產(chǎn)生抗藥性以及嚴(yán)重污染養(yǎng)殖環(huán)境等問題，因而在魚類養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用越來越受到限制；同時(shí)抗菌素的使用也不能滿足人們?nèi)找嬖鲩L(zhǎng)對(duì)無(wú)藥物殘留綠色水產(chǎn)品的需求。鰻弧菌病每年造成養(yǎng)殖魚類的經(jīng)濟(jì)損失高達(dá)近50億元人民幣。

因此，采用現(xiàn)代生物技術(shù)培育抗病力強(qiáng)、生長(zhǎng)速度快的養(yǎng)殖魚類新品種，已成為水產(chǎn)科技必須解決的重大課題，也是解決魚類病害問題的根本途徑。在魚類遺傳育種方面，國(guó)內(nèi)自二十世紀(jì)80年代開始，在淡水鯉科魚類上開展了一些雜交育種的研究工作，通過不同鯉魚之間的雜交相繼培育出快速生長(zhǎng)的穎鯉(潘光碧等，1989)、建鯉(張建森等1994)等新品種。在海水魚類遺傳育種研究方面，主要在牙鲆、大黃魚和大菱鲆上開展了人工雌核發(fā)育培育單性苗種的研究工作(王新成等，1997；王曉清等，2006；蘇鵬志等2008)；同時(shí)，還開展了一些分子標(biāo)記篩選和遺傳多樣性評(píng)價(jià)、種質(zhì)鑒定以及抗病相關(guān)MHC基因標(biāo)記篩選等方面的研究工作，(鄒曙明等，2000)采用RAPD技術(shù)對(duì)牙鲆和大菱鲆養(yǎng)殖群體遺傳結(jié)構(gòu)進(jìn)行的檢測(cè)分析；(尤峰等，2001)采用同工酶技術(shù)對(duì)山東近海牙鲆和養(yǎng)殖牙鲆的遺傳多樣性進(jìn)行的分析；(Liu等2005a，b)利用微衛(wèi)星標(biāo)記和AFLP技術(shù)評(píng)價(jià)牙鲆養(yǎng)殖群體和野生群體的遺傳結(jié)構(gòu)，表明養(yǎng)殖群體的遺傳多樣性具有一定程度的下降；(陳微等，2005)開展了牙鲆微衛(wèi)星標(biāo)記篩選和遺傳多樣性的分子研究；(張玉喜等2006)分析了牙鲆抗病魚和不抗病魚的MHC基因多態(tài)性，初步篩選到抗病相關(guān)的MHC基因型。(陳松林等，2008)開展了牙鲆抗病群體構(gòu)建和抗病性能初步測(cè)定的研究。但由于對(duì)魚類抗病優(yōu)良品種選育技術(shù)缺乏長(zhǎng)期系統(tǒng)的研究，至今我國(guó)還沒有一套有關(guān)魚類抗病優(yōu)良品系選育的技術(shù)方法的報(bào)道，也沒有建立人工選育的抗病優(yōu)良品種，而有關(guān)海水魚類牙鲆抗病優(yōu)良品種選育，特別是抗鰻弧菌病優(yōu)良品系選育的研究，目前國(guó)內(nèi)外尚未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了建立牙鲆抗病優(yōu)良品系選育方法，彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足，為魚類抗病良種品種培育提供方法，解決水產(chǎn)養(yǎng)殖中缺乏抗病優(yōu)良品系選育的問題，

本發(fā)明首先采用群體選育技術(shù)從病原菌感染的牙鲆魚苗中篩選出抗鰻弧菌病的魚作為抗病群體，隨后，收集了不同地理群體(如日本群體和黃海野生群體等)，采用種內(nèi)雜交技術(shù)將抗病群體與不同地理群體進(jìn)行交配建立家系，然后采用家系選育技術(shù)從大量的家系中篩選出抗鰻弧菌病的家系，又采用微衛(wèi)星分子標(biāo)記技術(shù)篩選出抗病家系特有的微衛(wèi)星標(biāo)記，用這些特異標(biāo)記進(jìn)一步指導(dǎo)抗病家系的選育；為了建立純系，使抗病性狀盡快固定化，本發(fā)明又采用人工雌核發(fā)育或近交技術(shù)使抗病家系盡快純化，經(jīng)過這樣的2-3代選育，獲得了抗病力提高20-47％的牙鲆抗病新品系。

一種牙鲆抗病優(yōu)良品系選育方法，包括一)、牙鲆群體選育；二)、牙鲆家系選育；其特征在于還包括三)、牙鲆抗病家系的分子標(biāo)記輔助選育；該輔助選育包括1)抗病家系特異分子標(biāo)記的篩選以得到抗病家系的特異微衛(wèi)星標(biāo)記，然后利用該特異微衛(wèi)星標(biāo)記進(jìn)行2)抗病分子標(biāo)記輔助選育，得到具有抗病家系特異微衛(wèi)星標(biāo)記的家系或個(gè)體；且上述一)、牙鲆群體選育包括：牙鲆抗病群體選育和/或不同地理群體的選育，以得到牙鲆抗病選育的第一代；上述二)、牙鲆家系選育包括1)、通過種內(nèi)雜交建立抗病家系，以及2)、抗病家系的篩選，和3)、抗病家系的生長(zhǎng)性狀選育，以得到牙鲆抗病選育的第二代。

上述的牙鲆抗病優(yōu)良品系選育方法，其特征在于還包括四)、牙鲆抗病家系的人工雌核發(fā)育選育，該人工雌核發(fā)育選育是1)將抗病選育的第二代的抗病家系進(jìn)行人工雌核發(fā)育誘導(dǎo)；以及2)人工雌核發(fā)育家系的抗病性能選育；和3)人工雌核發(fā)育家系的生長(zhǎng)性狀選育，以得到牙鲆抗病選育的第三代。