[發明專利]以幼嫩植株及幼葉片切塊為外植體的君子蘭離體繁殖方法

無效

• 申請號: 201010125852.5
• 申請日: 2010-03-17
• 公開（公告）號: CN101822218A
• 公開（公告）日: 2010-09-08
• 發明（設計）人: 王麗;王欽美;鄒凡雨
• 申請（專利權）人: 東北師范大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 長春市東師專利事務所 22202
• 代理人: 劉延軍;趙軍

技術領域

本發明為花卉繁殖方法，具體涉及君子蘭體外無性快速繁殖方法。

背景技術

植物組織培養即植物無菌培養技術，是根據植物細胞的全能性，利用植物體離體的器官(如根、莖、葉、莖尖、花、果實等)、組織(如形成層、表皮、皮層、胚乳等)或細胞(如大孢子、小孢子、體細胞等)以及原生質體，在無菌和適宜的人工培養基及光照、溫度等人工條件下，能誘導出愈傷組織、不定芽、不定根，形成完整的植株或產生具有經濟價值的其它產品的技術。由植物組織培養所產生的再生植株除了極低的變異外，基本都能保持親本(外植體來源植株)的優良性狀。植物組織培養技術發明以來已經取得了很大的進展，自上世紀60年代以來植物組織培養已經從實驗室研究階段成為一種大規模成批量的工廠化生產方法。君子蘭，是石蒜科君子蘭屬的多年生草本觀賞植株。原產南非高山，性喜溫涼，于本世紀初經由德國和日本引入我國，并安家落戶。是我國名貴花卉，經濟價值較高。它株型端莊、葉、花、果并美，深受國內外花卉愛好者的青睞。目前，君子蘭的繁殖方式主要為種子繁殖與分株繁殖，這兩種方式的繁殖速度都很慢：成齡君子蘭一年只開一次花，且種子至少需要9個月才能成熟；分株繁殖-年最多分出1～3株。由于君子蘭高度雜合，種子繁殖得到珍品君子蘭的得率很低，即便以珍品君子蘭做父母本得到珍品的幾率仍很低，珍品君子蘭在國內、國際市場一直供不應求。利用植物組織培養技術快速地離體繁殖君子蘭可以大規模產生株型統一的君子蘭，快速繁殖君子蘭優良稀缺品種，進一步滿足國內、國際市場的需求。前人所做的君子蘭組織培養實驗雖然已經初步獲得成功，但由于再生率低、再生周期長等限制了君子蘭組織培養技術在實際生產中的應用。本發明可使君子蘭在一年以內實現快速繁殖。

發明內容

為克服傳統繁殖方法產生君子蘭株型千差萬別、繁殖速度慢的缺點；也為了克服前人君子蘭組織培養實驗中再生率低(平均每塊外植體再生出0～2株再生芽)、再生周期長的缺點。提供一種以幼嫩植株及幼葉片切塊為外植體的君子蘭離體快速繁殖方法

本發明所采用的技術方案是：

1.外植體的獲得：取成熟種子，放入無菌超凈臺中，用75％(體積/體積)酒精浸泡1～2min，用0.1～0.2％(質量/體積)的氯化汞水溶液浸泡10～20分鐘，無菌水沖洗3～5遍，將種子接種到不含激素的1/2MS半固體培養基上，20～30℃每天8-12小時光照培養。

2.外植體接種及愈傷誘導：待步驟1種苗長出1-2片葉時，將小植株的地上部分(包括幼葉和幼莖)切為直徑3～5mm的小塊，接種在含6-BA1～2mg/L、NAA0.5～2.0mg/L、蔗糖3.0％(質量/體積)的MS半固體培養基上，20～30℃每天40W日光燈照射8～9小時。40～50天繼代一次，待長出黃色粒狀愈傷時即可誘導分化。也可用無菌再生植株幼嫩地上部分為外植體。

3.叢生芽的誘導：將愈傷轉接到誘導分化培養基：MS+KT(2.0～4.0mg/L)+2，4-D(0.2～0.5mg/L)+3.0％(質量/體積)蔗糖，40～50天繼代一次，20～30℃每天光照10～12小時。轉分化培養基4個月時從一片來源的愈傷可分化出121株再生苗。

4.根的誘導：再生植株轉到1/2MS+蔗糖2％(質量/體積)的生根培養基上，20～30℃每天10～14小時光照。

5.再生植株移栽：植株生根后便可移栽。腐殖土121℃滅菌30～60分鐘以上。移栽前將植株上的瓊脂等雜物沖洗干凈。7天左右澆一次透水便可成活。

本發明使君子蘭在相對短的時間內大量產生基因背景完全相同、株型統一的再生植株。以幼嫩植株地上部分的切塊為外植體的脫分化率均值可達72％，愈傷分化率均值可達87.5％，單片葉產生的愈傷經繼代可分化出幾百株再生苗，叢生芽生根率可達100％，在適宜環境下移栽成活率達100％。

本發明可以在不影響母株正常發育及繁殖的情況下使君子蘭在相對短的時間內大規模繁殖出遺傳背景相同、外觀整齊的植株；取材不受季節限制；再生周期短；脫分化率及分化率高；生根率高；移栽成活率高，植株移栽后生長狀態良好；非常適用于君子蘭稀缺品種的快速繁殖；適用于君子蘭“葉盤轉化法”轉基因；平均單株再生苗的成本極低，非常適合工廠化生產。

具體實施方式

下面將結合實際操作對本發明作進一步的說明，但本發明的范圍并不局限于以下的實施例。

實施例1：