[發(fā)明專利]鑒別自然感染和人工免疫口蹄疫病毒的ELISA試劑盒

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010116693.2
• 申請日: 2010-03-03
• 公開（公告）號: CN102190714A
• 公開（公告）日: 2011-09-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王麗穎;何春燕;王華
• 申請（專利權(quán)）人: 北京迪威華宇生物技術(shù)有限公司;金宇保靈生物藥品有限公司
• 主分類號: C07K14/09
• 分類號: C07K14/09;C12N15/42;G01N33/569
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及畜牧獸醫(yī)領(lǐng)域和生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地涉及一種可被用于鑒別口蹄疫病毒自然感染和接種疫苗動物重組口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白，也涉及一種鑒別口蹄疫病毒自然感染和接種疫苗動物的ELISA方法。

背景技術(shù)

口蹄疫(Foot-and-Mouth?Disease，F(xiàn)MD)是一種由口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth?DiseaseVirus，F(xiàn)MDV)引起的人及偶蹄動物共患的的急性、烈性傳染病。本病傳播途徑多，傳染性強(qiáng)，危害程度嚴(yán)重。國際獸疫局(Office?International?Des?Epizooties，OIE)將其列為A類傳染病。FMD是一種世界性的傳染病，先后在歐洲、拉丁美洲、非洲及亞洲等六十多個國家流行。

FMDV屬于小RNA病毒科口蹄疫病毒屬，病毒顆粒直徑20nm～30nm。FMDV有A、O、C、Asia?I、SAT?I、SAT?II、SATIII七種血清型，而每一血清型又分為多種亞型。不同血清型的病毒結(jié)構(gòu)蛋白誘生的中和抗體對另一血清型病毒沒有交叉保護(hù)反應(yīng)。FMDV的基因組是單鏈正股RNA。在FMDV基因的指導(dǎo)下，可產(chǎn)生12種病毒蛋白。這些病毒蛋白可被分為結(jié)構(gòu)蛋白(structuralproteins，SP)和非結(jié)構(gòu)蛋白(nonstructural?proteins，NSP)。結(jié)構(gòu)蛋白有VP1，VP2，VP3和VP4。非結(jié)構(gòu)蛋白有L，2A，2B，2C，3A，3B，3C和3D。在生成非結(jié)構(gòu)蛋白的過程中，3A，3B，3C或3A，3B可結(jié)合成3ABC或3AB蛋白[Grubman?MJ，et?al.Biochemical?map?ofpolypeptides?specified?by?foot-and-mouth?disease?virus.J.Virol?1984；50(2)：579-86]。非結(jié)構(gòu)蛋白基因序列高度保守，誘生的非中和性抗體，沒有型特異性[Saiz?M，NunezJI，et?al.Foot-and-mouth?disease?virus：biology?and?prospects?for?disease?control.Microbes?Infect.2002，4(11)：1183-92]。

發(fā)達(dá)國家控制FMD的主要策略是大面積的捕殺感染和疑似感染的動物，而在發(fā)展中國家控制FMD的主要策略是大面積注射常規(guī)疫苗。目前接種疫苗只能保護(hù)免疫動物不發(fā)病，但不能阻止隱性感染。在疫區(qū)接種疫苗的動物群中，有一定數(shù)量的動物因?yàn)殡[性感染而成為病毒攜帶者，這些動物有可能短期排毒，形成持續(xù)性感染，而病毒可在牛、羊體內(nèi)長期存在。因此，隱性感染動物不但可能引發(fā)新的疫情，還為病毒變異，產(chǎn)生新毒株提供了環(huán)境。自然感染口蹄疫病毒和接種疫苗動物的鑒別也是OIE判斷一個國家或地區(qū)有無疫情的依據(jù)[OfficeInternational?des?Epizooties，World?Organization?for?Animal?Health，2000.Foot?and?mouth?disease.In：OIE?Standards?Commission(Ed.)，Manual?of?Standards?for?Diagnostic?Tests?and?Vaccines，fourth?ed.Office?International?des?Epizooties，Paris，F(xiàn)rance，1-27(Chapter?2.1.1)]。另外，隱性感染動物對食品安全及進(jìn)出口貿(mào)易帶來巨大的隱患。接種疫苗和自然感染的動物都會產(chǎn)生口蹄疫病毒特異性抗體，如何區(qū)分自然感染口蹄疫病毒的動物和接種疫苗的動物一直是控制和消滅FMD的重要課題。

大量研究結(jié)果表明，通過檢測血清中口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白特異性抗體可以區(qū)分自然感染和接種疫苗的動物。自然感染的動物體內(nèi)有病毒的增殖，非結(jié)構(gòu)蛋白參與病毒增殖過程，因此導(dǎo)致大量非結(jié)構(gòu)蛋白的產(chǎn)生。非結(jié)構(gòu)蛋白具有較高的免疫原性，能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生非結(jié)構(gòu)蛋白特異性的抗體。而現(xiàn)有的口蹄疫疫苗主要是口蹄疫病毒滅活疫苗。在生產(chǎn)過程中，在滅活苗中的口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白應(yīng)被去除。口蹄疫病毒的基因重組疫苗主要采用口蹄疫病毒的結(jié)構(gòu)蛋白研制，不含任何口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白的成分。因此，即使多次接種疫苗后也不會刺激機(jī)體產(chǎn)生非結(jié)構(gòu)蛋白特異性的抗體。

發(fā)明內(nèi)容