[發(fā)明專利]腸炎沙門氏菌的PCR檢測方法、核酸及引物對

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010113922.5
• 申請日: 2010-02-25
• 公開（公告）號: CN101857896A
• 公開（公告）日: 2010-10-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 史賢明;劉斌;施春雷;何曉華;陳婧
• 申請（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/10;C12N15/11
• 代理公司: 上海交達(dá)專利事務(wù)所 31201
• 代理人: 王錫麟;王桂忠

1.一種腸炎沙門氏菌的PCR檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一，根據(jù)腸炎沙門氏菌的基因組DNA中堿基序列如SEQ?ID?NO：1所示的保守序列設(shè)計(jì)特異性擴(kuò)增引物對；

步驟二，提取樣品DNA，利用步驟一所得特異性擴(kuò)增引物對采用PCR法進(jìn)行擴(kuò)增；

步驟三，凝膠電泳檢測擴(kuò)增產(chǎn)物，判斷樣品是否含有腸炎沙門氏菌；

所述判斷具體為：檢測擴(kuò)增產(chǎn)物在656bp位置是否存在單一擴(kuò)增條帶，如果存在，則說明樣品中含有腸炎沙門氏菌；如果沒有，則樣品中不含有腸炎沙門氏菌。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的腸炎沙門氏菌的PCR檢測方法，其特征是，步驟一中，所述引物對具體為：正向引物的堿基序列如SEQID?NO：2所示，反向引物的堿基序列如SEQ?ID?NO：3所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的腸炎沙門氏菌的PCR檢測方法，其特征是，步驟二中，所述PCR法中，PCR檢測體系具體為：25μL反應(yīng)體系具體為，10×PCR反應(yīng)緩沖液2.5μL，25mmol/L的Mg²⁺2.0μL，2.5mmol/L的dNTP?1.0μL，5μM引物對1μL，Taq酶1U，樣品DNA模板溶液2～5μL，最后補(bǔ)水至25μL。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的腸炎沙門氏菌的PCR檢測方法，其特征是，步驟二中，所述PCR法中，PCR檢測體系擴(kuò)增參數(shù)具體為：94℃預(yù)變性5min，之后開始擴(kuò)增循環(huán)，每個(gè)循環(huán)的程序?yàn)椋?4℃變性30s，65℃退火30s，72℃延伸30s；循環(huán)共35個(gè)；循環(huán)結(jié)束后，72℃延伸10min，降溫至12℃，結(jié)束。

5.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的腸炎沙門氏菌的PCR檢測方法中的核酸，其特征在于，該核酸的堿基序列如SEQ?ID?NO：1所示。

6.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的腸炎沙門氏菌的PCR檢測方法中的引物對，其特征在于，該引物對具體為：正向引物的堿基序列如SEQ?ID?NO：2所示，反向引物的堿基序列如SEQ?ID?NO：3所示。