[發(fā)明專利]酶解白果蛋白制備多肽類活性物質(zhì)的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010112096.2
• 申請日: 2010-02-12
• 公開（公告）號: CN102086465A
• 公開（公告）日: 2011-06-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王成章;陳西娟;葉建中;陳虹霞;馬維新;周彬;程耀波
• 申請（專利權(quán)）人: 中國林業(yè)科學(xué)研究院林產(chǎn)化學(xué)工業(yè)研究所;邳州鑫源生物制品有限公司
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 張惠忠

1.一種酶解白果蛋白制備多肽類活性物質(zhì)的方法，其特征在于由以下步驟組成：

第一步，制備脫脂白果粉：將新鮮白果去殼，除衣皮，用打漿機(jī)在低于20℃的溫度下打漿成膏狀，然后用非極性溶劑或超臨界CO₂萃取油脂，再在-10℃--50℃冷凍干燥，得到水分的重量百分含量小于5％、破碎，過篩，得到粒度為100～200目的脫脂白果粉；

第二步，酶水解脫脂白果粉：將所述脫脂白果粉和去離子水按質(zhì)量比為1∶5～1∶15混合，再向其中添加酶，酶的添加質(zhì)量為所述脫脂白果粉的5％～20％，加熱使混合物溫度處于30～60℃下，調(diào)節(jié)使其pH值處于7～10，攪拌反應(yīng)3～48h，水解后離心分離，收集上清液；

第三步膜分離酶解液，截留分子量為3000-10000道爾頓多肽類活性物，在低于30℃下真空濃縮得到濃縮酶解液；

第四步多肽的純化：將質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為50～90％的乙醇或丙酮溶液與所述濃縮酶解液按體積比1-10∶1混合攪拌，沉淀多糖類物質(zhì)，離心過濾制得清液，再加入試劑，所述試劑為三氯乙酸、丙酮、(NH₄)₂SO₄中的任何一種或其混合物，所述試劑與所述清液體積比1-10∶1，并混合攪拌，沉淀得到多肽類活性物；

第五步白果多肽粉的制備：將第四步得到的所述多肽類活性物，依次用丙酮、乙醇、甲醇洗滌得到沉淀，沉淀在-10℃--50℃冷凍干燥，得到白果多肽粉。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶解白果蛋白制備多肽類活性物質(zhì)的方法，其特征在于，多肽類活性物分子量為3000-10000道爾頓，多肽的質(zhì)量百分含量為50～80％，所含水分的質(zhì)量百分含量低于5％，粒度100～200目；其中多肽中賴氨酸含量大于7％，組氨酸大于8％，絲氨酸大于11％，天冬氨酸大于14％，谷氨酸大于16％。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶解白果蛋白制備多肽類活性物質(zhì)的方法，其特征在于，酶為活性大于80萬u/g的木瓜蛋白酶，活性大于20萬u/g的枯草桿菌堿性蛋白酶，活性大于15萬u/g的中性蛋白酶、活性大于100萬u/g的纖維素酶、活性大于80萬u/g的果膠酶中的一種或一種以上的混合物。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶解白果蛋白制備多肽類活性物質(zhì)的方法，其特征在于，非極性溶劑為正己烷、乙醚、石油醚、6號溶劑油中任一種，與脫脂白果粉的液固比為1-20∶1，其中液體以毫升計(jì)量，固體以克計(jì)量。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶解白果蛋白制備多肽類活性物質(zhì)的方法，其特征在于，所述超臨界CO₂萃取壓力為10-30MPa，萃取溫度為25-50℃，萃取時(shí)間為1-4h，所用CO₂流量為10-30L/h，并使用質(zhì)量百分比濃度為1％-15％石油醚作為夾帶劑。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶解白果蛋白制備多肽類活性物質(zhì)的方法，其特征在于，所述第一步打漿的溫度為10℃-20℃.

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶解白果蛋白制備多肽類活性物質(zhì)的方法，其特征在于，所述第三步真空濃縮的溫度為0℃-30℃。