[發(fā)明專利]乙酰乙酸乙酯微生物轉(zhuǎn)化制備(S)-3-羥基丁酸乙酯的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201010108617.7 | 申請日： | 2010-02-09 |
| 公開（公告）號： | CN101824438A | 公開（公告）日： | 2010-09-08 |
| 發(fā)明（設計）人： | 歐志敏;陳曉彥;陳慶美 | 申請（專利權(quán)）人： | 浙江工業(yè)大學 |
| 主分類號： | C12P7/04 | 分類號： | C12P7/04;C12R1/865 |
| 代理公司： | 杭州天正專利事務所有限公司 33201 | 代理人： | 黃美娟;冷紅梅 |
| 地址： | 310014 *** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 乙酰 乙酸乙酯 微生物 轉(zhuǎn)化 制備 羥基 丁酸 方法 | ||
1.一種乙酰乙酸乙酯微生物轉(zhuǎn)化制備(S)-3-羥基丁酸乙酯的方法，其特征 在于所述方法是以乙酰乙酸乙酯為底物，以釀酒酵母(Saccharomyces? cerevisiae)CGMCC?No.2266發(fā)酵獲得的含酶菌體細胞為生物催化劑， 進行轉(zhuǎn)化反應制得所述(S)-3-羥基丁酸乙酯；所述方法包括：在pH 5.0～8.0的磷酸鹽緩沖液中，加入0.15～0.25mol/L的乙酰乙酸乙酯和以 細胞干重計為50g/L的以釀酒酵母CGMCC?No.2266發(fā)酵獲得的含酶菌 體細胞，并添加50～150g/L的葡萄糖作為輔助底物，于25～45℃下進行 轉(zhuǎn)化反應8～16小時，反應結(jié)束后，轉(zhuǎn)化液經(jīng)分離純化得到所述(S)-3- 羥基丁酸乙酯。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述含酶菌體細胞由如下方法 制備得到：將釀酒酵母CGMCC?No.2266接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，培養(yǎng) 溫度為26～35℃，搖床轉(zhuǎn)速為150～200r/min，培養(yǎng)18～30h得到含有 含酶菌體細胞的發(fā)酵液；所述發(fā)酵培養(yǎng)基按如下組成配制：葡萄糖 26～32g/L，酵母粉2～4g/L，硫酸銨3～6g/L，無水MgSO40.2～0.4g/L， K2HPO4·3H2O?0.5～1.5g/L，KH2PO40.6～1.5g/L，自然pH值，溶劑為 水。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述分離純化方法如下：將轉(zhuǎn) 化液離心分離棄去菌體細胞，取上清液50～70℃水浴1～2小時棄去沉淀， 取清液用等體積正己烷萃取，萃余液減壓蒸餾蒸出水分，殘余物用正 己烷溶解，所得混合液抽濾除去磷酸鹽，取正己烷層加入無水硫酸鈉 脫水，抽濾后，得到的正己烷溶液蒸餾除去正己烷即得所述(S)-3-羥基 丁酸乙酯。
4.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述方法如下：
(1)斜面培養(yǎng)：將釀酒酵母CGMCC?No.2266接種到斜面培養(yǎng)基， 26～35℃培養(yǎng)4～6天得菌體斜面；所述的斜面培養(yǎng)基按如下組成 配制：麥芽汁5～15g/L，酵母粉2～4g/L，蛋白胨4～6g/L，葡萄 糖7～12g/L，瓊脂15～25g/L，自然pH值，溶劑為水；121℃滅 菌20min，滅菌后冷卻制成斜面；
(2)種子培養(yǎng)：從斜面培養(yǎng)基取一環(huán)菌體轉(zhuǎn)接到種子培養(yǎng)基，26～35 ℃，搖床轉(zhuǎn)速為150～200r/min，培養(yǎng)18～26h得種子液；所述的 種子培養(yǎng)基按如下組成配制：葡萄糖26～32g/L，酵母粉2～4g/L， 硫酸銨3～6g/L，無水MgSO40.2～0.4g/L，K2HPO4·3H2O?0.5～1.5 g/L，KH2PO40.6～1.5g/L，自然pH值，溶劑為水；
(3)發(fā)酵培養(yǎng)：取種子液，以體積比10～20％的接種量接種于發(fā)酵培 養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為26～35℃，搖床轉(zhuǎn)速為150～200r/min，培養(yǎng) 18～30h得到含有含酶菌體細胞的發(fā)酵液，離心分離得到所述含 酶菌體細胞；所述發(fā)酵培養(yǎng)基按如下組成配制：葡萄糖26～32g/L， 酵母粉2～4g/L，硫酸銨3～6g/L，無水MgSO40.2～0.4g/L， K2HPO4·3H2O?0.5～1.5g/L，KH2PO40.6～1.5g/L，自然pH值，溶 劑為水；
(4)生物轉(zhuǎn)化：在pH?5.0～8.0的磷酸鹽緩沖液中，加入0.15～0.25mol/L 的乙酰乙酸乙酯和50～150g/L的葡萄糖，以及以細胞干重計為 50g/L的含酶菌體細胞，于25～45℃下進行轉(zhuǎn)化反應8～16小時；
(5)分離純化：轉(zhuǎn)化液離心分離棄去菌體細胞，取上清液50～70℃水 浴1～2小時棄去沉淀，取清液用等體積正己烷萃取，取萃余液減 壓蒸餾蒸出水分，殘余物用正己烷溶解，所得混合液抽濾除去磷 酸鹽，取正己烷層加入無水硫酸鈉脫水，抽濾后，得到的正己烷 溶液蒸餾除去正己烷即得所述(S)-3-羥基丁酸乙酯。
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