[發明專利]基于酶與蛋白質交聯的檢測空氣或水體中微生物含量的方法

無效

• 申請號: 201010104924.8
• 申請日: 2010-01-29
• 公開（公告）號: CN101818190A
• 公開（公告）日: 2010-09-01
• 發明（設計）人: 邢怡銘;郭永超;鐘明;黃英敏;羅國湧
• 申請（專利權）人: 廣州市香港科大霍英東研究院;利民(番禺南沙)電器發展有限公司
• 主分類號: C12Q1/28
• 分類號: C12Q1/28;C12Q1/06;G01N21/33
• 代理公司: 廣州知友專利商標代理有限公司 44104
• 代理人: 周克佑

1.一種基于酶與蛋白質交聯的檢測空氣或水體中微生物含量的方法，其特征是：先在待測樣品溶液中加入酶和交聯劑，通過交聯劑將酶與微生物的表面蛋白質交聯，膜過濾收集酶-微生物交聯結合物，然后加入特異性底物產生檢測信號，信號檢測值的大小與樣品中微生物的含量直接相關，從而實現對樣品中微生物的快速定量檢測；

若檢測空氣微生物則先將空氣中的微生物收集于水相。

2.按照權利要求1所述的基于酶與蛋白質交聯的檢測空氣或水體中微生物含量的方法，其特征是：所述加入試劑的種類和步驟：在待測樣品中先加入酶和交聯劑，充分交聯；再膜過濾收集微生物交聯產物，最后加入底物，檢測相應的信號即可知樣品中微生物的含量。

3.按照權利要求1或2所述的基于酶與蛋白質交聯的檢測空氣或水體中微生物含量的方法，其特征是步驟依次如下：

一、交聯：分別將酶和交聯劑加入待測樣品中，室溫20-25℃靜置交聯；

若是檢測空氣微生物，所述的待測樣品則使用現有技術將空氣中的微生物收集于水相；

所述的加入的酶分子數與樣品中微生物數之比大于16∶1；

所述的交聯劑加入的量依交聯劑種類和交聯方式按現有技術規范確定；

所述的靜置時間依交聯劑的選擇和交聯方式按現有技術規范確定；

二、分離：采用0.22μm孔徑微孔膜過濾法收集交聯微生物，用洗膜緩沖液沖洗去除未交聯的酶液；

三、檢測信號：加入特異性底物顯色液，顯色或產生電化學信號；

四、檢測：顯色30～60秒之后用紫外分光光度計檢測450nm吸光度，與不含有微生物的對照樣品比較，得出微生物濃度；

所述的試劑及待測樣品均需平衡至室溫20-25℃。

4.根據權利要求3所述的基于酶與蛋白質交聯的檢測空氣或水體中微生物含量的方法，其特征是：所述的酶為辣根過氧化物酶。

5.根據權利要求3所述的基于酶與蛋白質交聯的檢測空氣或水體中微生物含量的方法，其特征是：所述的交聯劑為：1％戊二醛，或是4mg/ml的碳化二亞胺加6mg/ml的N-羥基琥珀酰亞胺。

6.根據權利要求3所述的基于酶與蛋白質交聯的檢測空氣或水體中微生物含量的方法，其特征是：所述的顯色液為：以24.3ml0.1mol/L的檸檬酸與25.7ml0.2mol/L的磷酸氫二鈉混合，再加入50ml水配制而成的9.9ml?pH為5.0的磷酸-檸檬酸緩沖液，加入0.1ml?1％的四甲基聯苯胺TMB和10μl30％雙氧水H₂O₂制成。

7.根據權利要求3所述的基于酶與蛋白質交聯的檢測空氣或水體中微生物含量的方法，其特征是：所述的洗膜緩沖液為：以28ml0.2M磷酸二氫鈉與72ml?0.2M磷酸氫二鈉混合配制而成的PH＝7.2的磷酸鹽緩沖液。

8.根據權利要求3所述的基于酶與蛋白質交聯的檢測空氣或水體中微生物含量的方法，其特征是：所述的終止液為：2M的硫酸。