[發明專利]一種基于酶聯免疫法的快速檢測系統

無效

• 申請號: 201010103698.1
• 申請日: 2010-02-01
• 公開（公告）號: CN101769923A
• 公開（公告）日: 2010-07-07
• 發明（設計）人: 陶正杰;夏晶
• 申請（專利權）人: 陶正杰;夏晶
• 主分類號: G01N33/544
• 分類號: G01N33/544;G01N33/535;G01N21/31
• 代理公司: 南京眾聯專利代理有限公司 32206
• 代理人: 郭俊玲

技術領域

本發明涉及一種基于酶聯免疫法的快速檢測系統及其檢測方法，本發明還涉及一種可包被反應物的固相載體。

背景技術

本發明的基本理論體系是利用酶聯免疫法(ELISA)中的雙抗體夾心法測定未知抗原。將抗原免疫動物獲得的抗體吸附于固相表面，加抗原，形成抗原-抗體復合物；加與前一步同樣的抗體，形成抗體-抗原-抗體復合物，再加入酶標標記物；加入底物，結果判定：有色產物的生成量與抗原量成正相關。

現有酶聯免疫試劑盒的基本特征是：將抗原或抗體固定在固相載體上制成微孔板，利用酶標記的抗原或抗體及底物，檢測樣品中與固相載體上的抗原或抗體相應的抗原或抗體。傳統材質一般采用聚苯乙烯作為免疫吸附的載體，具有一定的局限性，其包埋率及親水性都有限，所以對樣品的前期處理要求嚴格，耗費大量時間，需要專業的技術人員和實驗室環境，在產品的使用操作和檢測靈敏度方面都受到了很大的限制，而且作為不可降解的傳統聚苯乙烯塑料，不利于環保。試劑盒通常設計為96孔或48孔的板狀，微孔板在操作上十分不便，樣品容易混淆，用肉眼辨別微孔上的變化容易誤判，若樣品數量較少則會造成微孔的閑置浪費。并且所有操作不能為普通使用者所掌握。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種基于酶聯免疫法的快速檢測系統。

本發明的第二個目的是提供上述檢測系統的檢測方法。

本發明的第三個目的是提供一種可包被反應物的固相載體。

本發明采用的技術方案是：

一種基于酶聯免疫法的快速檢測系統，包括置于一個檢測盒中的以下組件：a、檢測構件；b、用于放置目標樣品的空瓶；c、裝有經冷凍干燥后抗體的試劑瓶；d、裝有酶標標記物的試劑瓶；e、裝有用于定性的底物的試劑瓶；f、裝有用于定量的底物的試劑瓶；g、裝有緩沖溶液的試劑瓶。

所述檢測構件為包被有抗體的固相載體，并套有一個比色杯。

該固相載體的基質主體為聚羥基丁酸酯，其基質里還嵌入帶有活性功能團的化合物。

此化合物為聚氨基酸，嵌入的聚氨基酸與聚羥基丁酸酯基質的質量比為(0.1-8)∶100。

聚氨基酸為聚天門冬氨酸、聚賴氨酸或聚谷氨酸。

所述以聚羥基丁酸酯為基質主體的固相載體形狀為棒狀，即檢測棒。

所述檢測棒的制備方法為：將聚氨基酸與聚羥基丁酸酯按(0.1-8)∶100的質量比混合均勻后，送入壓塑機在110-210℃的加工溫度下進行壓塑并制成珠粒狀，然后再將珠粒狀壓塑物通過常規工藝制成棒狀，即得。

所述抗體可為任何種類的免疫球蛋白IgG，所述抗體的包被方法為：首先將抗體以20μg/ml溶于磷酸鹽緩沖溶液，將檢測棒浸入到抗體溶液中，放入冰箱冷藏過夜；然后取出檢測棒，再將其浸入封閉液中，封閉液為溶有體積濃度1％的Tween20的磷酸鹽緩沖溶液，室溫下靜置兩小時后，取出自然晾干；檢測棒套入比色杯中，2-8℃冷藏保存。

所述裝有經過冷凍干燥后的抗體的試劑瓶的制備方法為：將抗體以1mg/ml溶于磷酸鹽緩沖溶液，取20μl注入試劑瓶中，放入冷凍干燥器中過夜凍干，取出后2-8℃冷藏保存；

所述裝有酶標標記物試劑瓶的制備方法為：將1mg金黃色葡萄球菌蛋白A偶聯堿性磷酸酶保存于1ml的50×10^-3mol/L?Tris溶液中，然后再加入氯化鎂、氯化鋅、牛血清蛋白、甘油和疊氮化鈉，使氯化鎂達到1.0×10^-3mol/L、氯化鋅達到0.1×10^-3mol/L、牛血清白蛋白的體積濃度達到1％、甘油的體積濃度達到50％和疊氮化鈉達到15×10^-3mol/L，調pH值為8.0，即得工作濃度為1mg/ml的金黃色葡萄球菌蛋白A偶聯堿性磷酸酶；取0.4μl注入試劑瓶中，2-8℃冷藏保存；

所述用于定性測量的底物為5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸鹽(BCIP)與氯化硝基四氮唑藍(NBT)的混合液，所述裝有底物試劑瓶的制備方法為：將摩爾濃度為4.8×10^-4mol/L的BCIP和摩爾濃度為5.1×10^-4mol/L?NBT混合，然后取1ml混合液注入試劑瓶中，2-8℃冷藏并避光保存；

所述用于定量測量的底物為溶于體積濃度為10％的二羥乙基胺的硝基苯磷酸鹽，所述硝基苯磷酸鹽的質量濃度為1.0mg/ml，所述溶液的pH值為9.5，然后取1ml混合液注入試劑瓶中，2-8℃冷藏并避光保存；