[發明專利]具合成頭孢菌素酸類酶活性的生物催化劑的制備方法

無效

• 申請號: 201010102824.1
• 申請日: 2010-01-29
• 公開（公告）號: CN102296057A
• 公開（公告）日: 2011-12-28
• 發明（設計）人: 蔣用;斯克利亞仁科·安娜;張翔;庫偌什金娜·瓦連金娜;胡遠輝;薩塔偌娃·熱尼;賈愛瓊;克列斯季安洛瓦·伊琳娜;周亮;亞諾斯基·舍戈;熊輝
• 申請（專利權）人: 中國醫藥集團總公司四川抗菌素工業研究所;俄羅斯聯邦國家科學中心工業微生物遺傳育種研究所
• 主分類號: C12N11/08
• 分類號: C12N11/08;C12N9/00;C12R1/19
• 代理公司: 成都和睿達專利代理事務所(普通合伙) 51217
• 代理人: 陶紅

1.一種具有合成頭孢菌素酸類酶活性的生物催化劑的制備方法，包括具有頭孢菌素酸合成酶活性的產生菌的培養及固定具有胞內酶活性的成熟細胞，把細胞懸浮在多聚酰胺單體溶液中，隨后在引發劑和加速劑作用下形成凝膠。

2.如權利要求1所述的生物催化劑的制備方法，其特征在于具有頭孢菌素酸合成酶活性的大腸埃希氏菌菌株是CGMCC?No.3508或VKPM?B-10182。

3.如權利要求1所述的生物催化劑的制備方法，其特征在于以目標酶在胞內胞外的分配常數K_dist來確定具有頭孢菌素酸合成酶活性產生菌培養的終止時間，即發酵液pH7.9-8.2，K_dist≥350時終止頭孢菌素酸合成酶的生物合成，發酵停止。

4.如權利要求1所述的生物催化劑的制備方法，其特征在于得到的細菌細胞經戊二醛交聯修飾，再按照每克聚合混合物中含100-150mg干細胞量這樣的濃度在聚丙烯酰胺單體溶液中反應形成凝膠，從而制得固定化細胞。

5.如權利要求1所述的生物催化劑的制備方法，其特征在于選擇優化好的戊二醛濃度及交聯時間，菌絲細胞先經戊二醛交聯修飾后再懸浮于聚丙烯酰胺凝膠單體溶液中。

6.如權利要求1所述的生物催化劑的制備方法，其特征在于細胞修飾時戊二醛的加入濃度為1×10^-3-9×10^-3mmo1/mg蛋白，細胞的交聯修飾在5-30分鐘內完成。