[發明專利]同時檢測兩種木質素降解酶功能基因的生物傳感器及其制備和檢測方法及電化學檢測系統

無效

• 申請號: 201010102312.5
• 申請日: 2010-01-28
• 公開（公告）號: CN101880627A
• 公開（公告）日: 2010-11-10
• 發明（設計）人: 湯琳;李貞;曾光明;范長征;黎媛萍;劉燦;晏銘;陳耀寧
• 申請（專利權）人: 湖南大學
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34;C12Q1/68
• 代理公司: 湖南兆弘專利事務所 43008
• 代理人: 趙洪;楊斌

1.一種同時檢測兩種木質素降解酶功能基因的生物傳感器，該生物傳感器包括一用作三電極電解池工作電極的金電極，其特征在于：所述金電極上同時固定有編碼錳過氧化物酶功能基因的巰基修飾捕獲探針M₁和編碼纖維二糖脫氫酶功能基因的巰基修飾捕獲探針C₁，所述金電極表面上除所述捕獲探針M₁和捕獲探針C₁以外的剩余結合位點均采用巰基己醇封閉；

所述捕獲探針M₁的DNA序列為5’-HS-(CH₂)₆-CTGATGGTGTCGTGTTTCT-3’；

所述捕獲探針C₁的DNA序列為5’-HS-(CH₂)₆-TGTCAAAGTGGCAGTTCCCGT-3’。

2.一種如權利要求1所述的同時檢測兩種木質素降解酶功能基因的生物傳感器的制備方法，包括以下步驟：

(1)配備捕獲探針溶液：準備所述DNA序列的捕獲探針M₁和捕獲探針C₁，并配制成濃度為60～100μM的捕獲探針M₁溶液和濃度為60～100μM的捕獲探針C₁溶液；

(2)金電極預處理：將一金電極浸入Piranha溶液中浸泡，然后拋光至鏡面，再對拋光后的金電極進行超聲清洗，洗凈后干燥金電極表面；以干燥后的金電極為工作電極，在電化學工作站進行循環伏安法掃描，直至得到穩定閉合的循環伏安圖，完成金電極的預處理；

(3)捕獲探針的固定：將制備得到的捕獲探針M₁溶液和捕獲探針C₁溶液混勻，再滴加到預處理后的所述金電極表面進行自組裝，自組裝完成后進行清洗除去未組裝的捕獲探針M₁和捕獲探針C₁；

(4)封閉剩余結合位點：將固定有所述捕獲探針M₁和捕獲探針C₁后的金電極浸入1～2mM的巰基己醇中，室溫下對所述金電極表面剩余的結合位點進行封閉，封閉完成后清洗該金電極表面，得到同時檢測兩種木質素降解酶功能基因的生物傳感器。

3.根據權利要求2所述的同時檢測兩種木質素降解酶功能基因的生物傳感器的制備方法，其特征在于：滴加在所述金電極表面的捕獲探針M₁和捕獲探針C₁的用量均為3～5μL；所述自組裝過程是在0℃～4℃的恒溫條件下進行，自組裝的時間為10～14h。