[發(fā)明專利]寡核苷酸檢測(cè)方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200980141009.1
• 申請(qǐng)日: 2009-10-06
• 公開（公告）號(hào): CN102186993A
• 公開（公告）日: 2011-09-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: I·羅爾;M·舒斯特;S·塞福爾特
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 弗·哈夫曼-拉羅切有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 北京市中咨律師事務(wù)所 11247
• 代理人: 胡志君;黃革生

1.檢測(cè)寡核苷酸的方法，其包括以下步驟：

(a)選擇含有或懷疑含有所述寡核苷酸的樣本；

(b)通過使該樣本與熒光標(biāo)記的肽核酸(PNA)探針接觸形成雜交混合物，其中所述的肽核酸探針與所述寡核苷酸的至少10個(gè)或更多個(gè)核苷酸完全互補(bǔ)；

(c)通過陰離子交換高效液相色譜(HPLC)將所述寡核苷酸和所述PNA探針之間形成的雜交部分與未雜交部分分開；以及

(d)通過熒光光譜法定性或定量檢測(cè)所述雜交部分。

2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，用于從一個(gè)樣本中平行地檢測(cè)寡核苷酸雙鏈體的兩條鏈，其包括在步驟(b)之后加入第二熒光標(biāo)記的PNA探針，然后進(jìn)行步驟(c)至(d)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，用于定量或定量分析siRNA和其衍生物。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3的方法，用于定量或定性分析治療性siRNA和其衍生物的體內(nèi)代謝。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4的方法，用于定量或定性分析胞外和胞內(nèi)遞送的siRNA。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5的方法，其中將已知濃度的需待測(cè)寡核苷酸添加至樣本。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6的方法，其中所述PNA探針用Atto?610、Atto?425或Atto?520標(biāo)記。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7的方法，其中所述樣本是組織或血漿裂解物。

9.用于定性和定量檢測(cè)寡核苷酸的一條鏈或兩條鏈的試劑盒，所述試劑盒由板制備物組成，其中向所述板制備物中添加了根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的方法的所有組分。

10.根據(jù)權(quán)利要求9的試劑盒，其中所述的板制備物是自動(dòng)化的板制備物。

11.根據(jù)權(quán)利要求9的試劑盒，其中所述的板制備物是自動(dòng)化的96孔或384孔板制備物。

12.基本上如上文所述，尤其是參考前述實(shí)施例的方法和試劑盒。