[發明專利]經修飾的RNAi多核苷酸及其用途

有效

• 申請號: 200980112313.3
• 申請日: 2009-02-11
• 公開（公告）號: CN102016036A
• 公開（公告）日: 2011-04-13
• 發明（設計）人: 帕梅拉·A·帕夫科;喬安妮·卡門斯;托德·M·伍爾夫;威廉·薩洛蒙;阿納斯塔西婭·赫沃羅娃
• 申請（專利權）人: 阿克賽醫藥公司
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C07H21/02;A61K31/713
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 顧晉偉;彭鯤鵬

1.用于抑制靶基因表達的長度為12至49個核苷酸的雙鏈RNA(dsRNA)構建體，所述dsRNA包含：

(1)具有5′端和3′端的有義鏈，其中所述有義鏈的所述5′和3′端各有一個或多個核苷酸具有2′修飾的核糖，和，

(2)具有5′端和3′端的反義鏈，其與所述有義鏈雜交并與所述靶基因的mRNA雜交，其中所述反義鏈在從該反義鏈5′端起的第二個核苷酸處包含2′修飾的核糖，

其中(a)所述dsRNA對Dicer的切割有抗性，(b)所述反義鏈與RISC結合，并且(c)所述dsRNA以序列依賴性方式抑制靶基因的表達。

2.用于抑制靶基因表達的長度為12-49個核苷酸的雙鏈RNA(dsRNA)構建體，所述dsRNA包含：

(1)具有5′端和3′端的有義鏈，其中所述有義鏈的所述5′和3′端各有一個或多個核苷酸具有2′修飾的核糖，和，

(2)具有5′端和3′端的反義鏈，其與所述有義鏈雜交以及與所述靶基因的mRNA雜交，其中所述反義鏈在該反義鏈的3′端包含：

(i)具有不可水解的核苷酸間連接的至少四個連續的2′-修飾核糖，

(ii)1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個2′修飾的核糖，優選2′-O-甲基修飾的核糖，或，

(iii)保護基，

其中(a)所述dsRNA對Dicer的切割有抗性，(b)所述反義鏈與RISC結合，并且(c)所述dsRNA以序列依賴性方式抑制靶基因的表達。

3.用于抑制靶基因表達的長度為12-49個核苷酸的雙鏈RNA(dsRNA)構建體，所述dsRNA包含：

(1)具有5′端和3′端的有義鏈，其中所述有義鏈的所述5′和3′端各有一個或多個核苷酸具有2′修飾的核糖，并且所述有義鏈在從該有義鏈3′端起的第二個核苷酸處包含錯配核苷酸，和，

(2)具有5′端和3′端的反義鏈，其與所述有義鏈雜交并與所述靶基因的mRNA雜交，

其中(a)所述dsRNA對Dicer的切割有抗性，(b)所述反義鏈與RISC結合，并且(c)所述dsRNA以序列依賴性方式抑制靶基因的表達。

4.用于抑制靶基因表達的長度為12-49個核苷酸的雙鏈RNA(dsRNA)構建體，所述dsRNA包含：

(1)具有5′端和3′端的有義鏈，其中所述有義鏈的所述5′和3′端各存在四個連續的2′-O-甲基核苷酸，和，

(2)具有5′端和3′端的反義鏈，其與所述有義鏈雜交并與所述靶基因的mRNA雜交，其中所述反義鏈：

(a)包含具有硫代磷酸酯連接的至少四個連續2′-O-甲基修飾的3′端核苷酸；或，

(b)在5′端第二個核苷酸處包含2′-O-甲基修飾的核苷酸，并且沒有其他經修飾核苷酸，

其中(a)所述dsRNA對Dicer的切割有抗性，(b)所述反義鏈與RISC結合，并且(c)所述dsRNA以序列依賴性方式抑制靶基因的表達。

5.用于抑制靶基因表達的長度為12-49個核苷酸的雙鏈RNA(dsRNA)構建體，所述dsRNA包含：

(1)具有5′端和3′端的有義鏈，其中所述有義鏈在5′端和3′端分別包含12個和10個連續的2′-O-甲基核苷酸，和，

(2)具有5′端和3′端的反義鏈，其與所述有義鏈雜交并與所述靶基因的mRNA雜交，其中所述反義鏈：

(a)是未修飾的；

(b)包含具有硫代磷酸酯連接的至少四個連續的2′-O-甲基修飾3′端核苷酸；或，

(c)在5′端第二個核苷酸處包含2′-O-甲基修飾的核苷酸，并且沒有其他經修飾核苷酸，

其中(a)所述dsRNA對Dicer的切割有抗性，(b)所述反義鏈與RISC結合，并且(c)所述dsRNA以序列依賴性方式抑制靶基因的表達。

6.根據權利要求1-5中任一項的dsDNA，其中所述反義鏈指導靶基因mRNA在從反義鏈5′端起第10和第11個核苷酸之間的單個位點發生均一切割。

7.根據權利要求1-5中任一項的dsDNA，其中所述dsRNA的有義鏈可在從有義鏈3′端起第10和第11個核苷酸之間的單個位點被RISC切割。

8.根據權利要求1-5中任一項的dsDNA，其中所述dsRNA構建體是平末端的。