[發明專利]凝集性酵母及其制備方法

無效

• 申請號: 200980107511.0
• 申請日: 2009-03-18
• 公開（公告）號: CN101983240A
• 公開（公告）日: 2011-03-02
• 發明（設計）人: 赤田倫治;S·農克朗;星田尚司;B·M·A·阿布戴樂-巴納特
• 申請（專利權）人: 國立大學法人山口大學
• 主分類號: C12N15/09
• 分類號: C12N15/09;C12N1/19
• 代理公司: 北京泛華偉業知識產權代理有限公司 11280
• 代理人: 郭廣迅

1.具有凝集性和耐熱性的馬克斯克魯維酵母(Kluyveromycesmarxianus)轉化株的制備方法，其特征在于，依次含有下述工序(A)～(C)：

(A)在釀酒酵母(Saccharomyces?cerevisiae)的內源性FLO基因的上游導入標記基因序列和表達啟動子序列來制備釀酒酵母轉化株的工序；

(B)由染色體DNA得到含有標記基因序列、表達啟動子序列、和FLO基因序列的DNA片段的工序，所述染色體DNA源于工序(A)中制備的釀酒酵母轉化株；

(C)將工序(B)中得到的DNA片段作為FLO基因表達盒導入馬克斯克魯維酵母，制備馬克斯克魯維酵母轉化株的工序。

2.根據權利要求1所述的馬克斯克魯維酵母轉化株的制備方法，其特征在于，釀酒酵母的內源性FLO基因是選自FLO1基因、FLO5基因、FLO9基因、和FLO10基因中的1種以上的FLO基因。

3.根據權利要求1或2所述的馬克斯克魯維酵母轉化株的制備方法，其特征在于，標記基因為營養缺陷型標記基因。

4.根據權利要求1～3中任一項所述的馬克斯克魯維酵母轉化株的制備方法，其特征在于，營養缺陷型標記基因是組氨酸、亮氨酸、尿嘧啶、蛋氨酸、賴氨酸、腺嘌呤、色氨酸、精氨酸的至少1種的營養缺陷型基因。

5.根據權利要求4所述的馬克斯克魯維酵母轉化株的制備方法，其特征在于，營養缺陷型標記基因是URA3基因。

6.根據權利要求1～5中任一項所述的制備方法，其特征在于，馬克斯克魯維酵母是在組氨酸、亮氨酸、尿嘧啶、蛋氨酸、賴氨酸、腺嘌呤、色氨酸、精氨酸的至少1種的營養缺陷型基因中具有突變的馬克斯克魯維酵母突變體。

7.根據權利要求1～6中任一項所述的馬克斯克魯維酵母轉化株的制備方法，其特征在于，表達啟動子是3-磷酸甘油醛脫氫酶(TDH3)啟動子。

8.根據權利要求1～7中任一項所述的馬克斯克魯維酵母轉化株的制備方法，其特征在于，將線狀的DNA片段作為FLO基因表達盒導入馬克斯克魯維酵母。

9.根據權利要求1～8中任一項所述的馬克斯克魯維酵母轉化株的制備方法，其特征在于，馬克斯克魯維酵母轉化株是RAK4299株(NITEBP-514)、RAK4300株(NITE?BP-515)、RAK4301株(NITE?BP-516)、或者RAK4302株(NITE?BP-517)。

10.由權利要求1～8中任一項所述的制備方法制備的、具有凝集性和耐熱性的馬克斯克魯維酵母轉化株。

11.根據權利要求10所述的馬克斯克魯維酵母轉化株，其特征在于，其是RAK4299株(NITE?BP-514)、RAK4300株(NITE?BP-515)、RAK4301株(NITE?BP-516)、或者RAK4302株(NITE?BP-517)。