[發(fā)明專利]病毒檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710093385.4
• 申請日: 2017-02-21
• 公開（公告）號(hào): CN106771196A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 程錦泉;熊玲紅;張仁利
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市疾病預(yù)防控制中心
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569;G01N33/577;G01N21/33
• 代理公司: 深圳中一聯(lián)合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司44414
• 代理人: 張全文

1.一種病毒檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

利用不同濃度的雙氧水還原同一濃度的氯金酸制備納米金，獲取納米金標(biāo)準(zhǔn)溶液的顏色由紅色變?yōu)樽仙珪r(shí)雙氧水的閾值濃度；

提供可與被檢測病毒結(jié)合的免疫磁球，將所述免疫磁球加入被檢測樣本溶液中進(jìn)行孵育、磁分離，得到包含所述免疫磁球的第一復(fù)合物；

向所述第一復(fù)合物中加入所述被檢測病毒的多克隆抗體進(jìn)行孵育、磁分離后，再加入生物素標(biāo)記的二抗進(jìn)行孵育、磁分離，得到包含所述免疫磁球的第二復(fù)合物；

向所述第二復(fù)合物中加入鏈霉親和素-過氧化氫酶復(fù)合物，進(jìn)行孵育、磁分離，得到包含所述免疫磁球的第三復(fù)合物；

向所述第三復(fù)合物中分別加入閾值濃度的雙氧水和氯金酸進(jìn)行反應(yīng)，生成納米金溶液，根據(jù)所述納米金溶液的顏色，確定所述被檢測樣本溶液中是否含有所述被檢測病毒：

當(dāng)所述納米金溶液呈紅色時(shí)，所述被檢測樣本不含所述被檢測病毒；

當(dāng)所述納米金溶液呈紫色或藍(lán)色時(shí)，所述被檢測樣本含所述被檢測病毒。

2.如權(quán)利要求1所述的病毒檢測方法，其特征在于，所述免疫磁球的制備過程為：利用EDC/NHS活化法將所述被檢測病毒的單克隆抗體偶聯(lián)到磁性納米球表面，并用含有牛血清白蛋白和疊氮化鈉的磷酸鹽緩沖溶液保存所述免疫磁球。

3.如權(quán)利要求2所述的病毒檢測方法，其特征在于，所述磁性納米球表面帶羧基，所述磁性納米球?yàn)槌槾徘颍抑睆綖?00nm。

4.如權(quán)利要求2所述的病毒檢測方法，其特征在于，所述免疫磁球在所述磷酸鹽緩沖溶液中的濃度為1-2mg/mL。

5.如權(quán)利要求1所述的病毒檢測方法，其特征在于，所述免疫磁球加入被檢測樣本溶液中進(jìn)行孵育的條件為：37℃，150rpm搖床30min。

6.如權(quán)利要求5所述的病毒檢測方法，其特征在于，所述第一復(fù)合物中加入所述被檢測病毒的多克隆抗體進(jìn)行孵育的條件為：37℃，150rpm搖床30min；

所述第二復(fù)合物中加入鏈霉親和素-過氧化氫酶復(fù)合物，進(jìn)行孵育的條件為：37℃，150rpm搖床1h。

7.如權(quán)利要求6所述的病毒檢測方法，其特征在于，所述被檢測病毒的多克隆抗體和所述生物素標(biāo)記的二抗質(zhì)量比為1：2。

8.如權(quán)利要求1所述的病毒檢測方法，其特征在于，向所述第三復(fù)合物中分別加入閾值濃度的雙氧水和氯金酸的體積相等，且所述氯金酸的濃度為0.40mM時(shí)，所述雙氧水的閾值濃度為0.36mM。

9.如權(quán)利要求1-8任一所述的病毒檢測方法，其特征在于，所述被檢測病毒為EV71病毒，且所述單克隆抗體為抗VP1單克隆抗體，所述多克隆抗體為抗VP1多單克隆抗體。

10.如權(quán)利要求9所述的病毒檢測方法，其特征在于，定量檢測所述EV71病毒濃度的吸收波長為540nm。