[實用新型]藏綿羊耐寒性等位基因檢測試劑盒

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200920152846.1
• 申請日: 2009-04-10
• 公開（公告）號: CN201381324Y
• 公開（公告）日: 2010-01-13
• 發(fā)明（設計）人: 羅玉柱;胡江;楊果;方素櫟;成述儒
• 申請（專利權）人: 甘肅農業(yè)大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 蘭州振華專利代理有限責任公司
• 代理人: 張 真

技術領域

本實用新型涉及動物基因工程領域，具體地說涉及以藏綿羊耐寒性相關基因ADRB3基因的等位基因檢測試劑盒。

背景技術

中國是世界羊產業(yè)大國，羊品種資源豐富，養(yǎng)羊數量居世界首位。2005年，全世界存欄綿羊、山羊分別為10.8億只和8.1億只，其中中國分別占有1.7億只和2.0億只。2007年全世界綿羊、山羊品種分別有995個和512個，其中中國分別占有50個和50個(FAO，2007)。據統計，2007年在中國六大牧區(qū)，即新疆、西藏、內蒙、青海、四川和甘肅羊只存欄數1.6億只，占全國的43.9％，其中存欄綿羊1.1億只，占全國綿羊總存欄數的65.6％。這些地區(qū)的海拔在2500m-5000m的高原地區(qū)，因此，高原型綿羊在中國綿羊總存欄數中占有很大比例，然而，中國北方大部分地區(qū)冬春季嚴寒多風，也正值母羊產羔高峰期。由于羔羊出生時體溫調節(jié)機能尚不完善，抵御寒冷的能力較弱，很容易出現羔羊被凍死的現象，新疆每年有14-16萬只羊在越冬中死亡，其中羔羊占60％左右，據統計，在高原牧區(qū)由于綿羊越冬凍死帶來的經濟損失每年為500-700萬元。

國內外利用傳統方法改善綿羊越冬的耐寒性嘗試了多種方案，其中包括建造暖棚，為綿羊穿上冬衣，改善飼喂條件等。但這些方法皆由于經濟耗費高，實用性差或效果不明顯等原因，并不能從根本上解決羔羊越冬的成活率問題。事實上，綿羊的耐寒性是一種受環(huán)境因素與遺傳因素互作的質量性狀，也就是說在相同的外界溫度，飼喂和管理體制的條件下，決定綿羊越冬成活率的主要因素便是自身的遺傳特征。

隨著分子標記輔助育種(Marker-assisted?Selection，MAS)技術的成熟，提高群體內綿羊的耐寒性和增加高寒地區(qū)綿羊存活率已成為可能。

1987年，Slee在綿羊育種實踐中發(fā)現，蘇格蘭黑面綿羊(Scottish?Black-face?sheep)中存在著不同耐寒性的綿羊類群，其中耐寒性較差的一組，其后代不具有腎上腺素表達的應激反應。這種性狀為單基因效應，以孟德爾方式遺傳，且為顯性遺傳(Simpson和Slee，1988)。該單基因效應與兒茶酚胺介導產生的非顫抖熱有關(Slee和Simpson，1991)。

自此，國內外專家為定位綿羊耐寒性的主效基因做了大量努力。2000年，Forrest和Hickford對牛、山羊和綿羊的β3-AR基因，通過克隆測序獲得了全序列。Forrest等利用PCR-SSCP技術對新西蘭境內的12個美利奴綿羊半同胞大群體的β3-AR基因開展了突變分析，并與相應群體的表型數據進行相關分析，結果是位于β3-AR基因內中的一段包含部分內含子(intron)的區(qū)域表現出了高度多態(tài)性，且其多態(tài)性與藏綿羊的初生重、生長率、屠宰重和耐寒性有關。擴大研究群體后進一步發(fā)現，這種相關主要集中在綿羊的耐寒性表型值上，并確立了相應等位基因的耐寒性關聯值(Forrest?et?al.，2003，2006，2007)。

2005年，Zhou等通過數據分析將該片段集中于內含子調控區(qū)的一段長為263bp的片段，并通過對已有系統進行優(yōu)化，建立了耐寒性的商業(yè)檢測系統。然而該系統，缺乏新西蘭國外品種的數據，因此也未有涉及來自中國的綿羊品種，數據庫的存量仍顯不足。

實用新型內容

本實用新型的目的在于避免現有技術的不足提供一種藏綿羊耐寒性等位基因檢測試劑盒。為了克服傳統技術提高藏綿羊越冬耐寒性的不足，我們利用分子生物學技術對藏綿羊的耐寒性相關基因，并通過對檢測到藏綿羊等位基因進行分級從而得到該個體的耐寒性強弱。該技術不僅能檢測出藏綿羊耐寒性的強弱，而且能對該個體藏綿羊及進行遺傳背景分析，從而從個體自身水平提高藏綿羊耐寒性的選育。

本實用新型的目的是提供一種藏綿羊耐寒性等位基因檢測試劑盒。

依據現有體系，利用ADRB3這一分子標記基因，建立了新的基于聚合酶鏈式反應-單鏈構象多態(tài)性(PCR-SSCP)的藏綿羊耐寒性檢測體系。

為實現上述目的，本實用新型采取的技術方案為一種藏綿羊耐寒性等位基因檢測試劑盒，包括有盒體(1)，襯墊(2)，在襯墊(2)上設有數個容器孔，其主要特點是在容器孔中分別放置PCR反應液(4)，ADRB3基因的等位基因A的DNA標準樣(10)/C的DNA標準樣(11)/E的DNA標準樣(12)。