[發(fā)明專利]一種脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)化雙孢蘑菇菌褶的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410832003.1
• 申請日: 2014-12-29
• 公開（公告）號(hào): CN104651389A
• 公開（公告）日: 2015-05-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邱立友;劉冬忍;張朝輝;高玉千;戚元成;申進(jìn)文
• 申請（專利權(quán)）人: 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/80
• 分類號(hào): C12N15/80
• 代理公司: 鄭州聯(lián)科專利事務(wù)所(普通合伙) 41104
• 代理人: 時(shí)立新;楊海霞

1.一種脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)化雙孢蘑菇菌褶的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）采摘菌褶未破的幼嫩雙孢蘑菇子實(shí)體，清潔表面后，收集菌褶組織并切成塊，獲得菌褶組織塊；

2）將脂質(zhì)體Lipofectamine?^TM?2000和質(zhì)粒pBHg-dsACO混勻，于-5－5℃放置15－60?min；

3）將步驟2）產(chǎn)物用無菌超純水稀釋1000倍，然后與步驟1）菌褶組織塊混勻，室溫放置80－120?min；

4）將步驟3）所得產(chǎn)物加入到RCM固體培養(yǎng)基中，20－30℃培養(yǎng)8－12d；

5）將萌發(fā)的雙孢蘑菇菌褶組織塊轉(zhuǎn)移到含潮霉素的PDA平板上，20－30℃培養(yǎng)10－20d；

6）切下新生長的菌絲塊移植到PDA斜面進(jìn)行培養(yǎng)，如此傳代培養(yǎng)2－5次，再轉(zhuǎn)接到含潮霉素的PDA平板上，能夠正常生長的即為轉(zhuǎn)化子。

2.如權(quán)利要求1所述脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)化雙孢蘑菇菌褶的方法，其特征在于，所述步驟2）中將1?μL脂質(zhì)體Lipofectamine?^TM?2000和2－3?μg質(zhì)粒pBHg-dsACO混勻。

3.如權(quán)利要求1所述脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)化雙孢蘑菇菌褶的方法，其特征在于，所述步驟4）中的RCM固體培養(yǎng)基組成為：胰蛋白胨2.0?g，酵母提取物2.0?g，MgSO₄·7H₂O?0.5?g，K₂HPO_4?0.46?g，KH₂PO_4?1?g，葡萄糖20?g，瓊脂20?g，甘露醇109.3?g，蒸餾水1000?mL，pH?7.0。

4.如權(quán)利要求1所述脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)化雙孢蘑菇菌褶的方法，其特征在于，所述步驟5）和6）中的PDA平板含潮霉素濃度為20－100?μg/mL。