[實用新型]多波長核酸蛋白層析分離和檢測裝置

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200920044525.X
• 申請日: 2009-06-04
• 公開（公告）號: CN201449370U
• 公開（公告）日: 2010-05-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐順利
• 申請（專利權(quán)）人: 南京大學(xué)
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G02B7/00
• 代理公司: 南京天翼專利代理有限責(zé)任公司 32112
• 代理人: 陳建和

一、技術(shù)領(lǐng)域：

本實用新型是生物化學(xué)和生物制藥領(lǐng)域的專用分離檢測方法與設(shè)備，尤其是涉及多波長核酸蛋白層析分離檢測方法和系統(tǒng)。

二、背景技術(shù)：

在科學(xué)研究和生產(chǎn)過程中，存在著大量的蛋白質(zhì)、核酸和多肽等生物大分子的分析、分離和純化工作，迫切需要高效快速的分析、分離和制備方法。目前廣泛采用的生化分離技術(shù)主要有沉淀分離、層析分離、電泳分離、離心分離、膜分離技術(shù)。而層析分離技術(shù)以其獨特的優(yōu)勢始終占據(jù)著生物大分子純化技術(shù)的主導(dǎo)地位。層析系統(tǒng)包括兩個相：固定相和移動相。當(dāng)移動相流過加有樣品的固定相時，由于各組分在兩相之間的分配比例不同，各組分就會以不同速度移動而互相分離開來。根據(jù)固定相基質(zhì)的形式，層析可以分為紙層析、薄層層析和柱層析。生化技術(shù)中常用的凝膠層析、離子交換層析等通常采用柱層析方法。柱層析系統(tǒng)主要有兩部分組成，層析柱系統(tǒng)和檢測器系統(tǒng)。根據(jù)研究對象設(shè)計層析柱系統(tǒng)，包括柱體、固定相、流動相(洗脫劑)、流速等，已形成專門研究領(lǐng)域。檢測器是柱層析系統(tǒng)分析、分離和純化工作的“眼睛”，主要有紫外(UV)吸收、示差折光、介電常數(shù)等。其中紫外吸收檢測器是柱層析系統(tǒng)應(yīng)用最廣的檢測器，它有①靈敏度高，最低檢測濃度可達10^-10g/mL②受操作條件和外界環(huán)境影響小，適于梯度洗脫③對無紫外吸收的物質(zhì)組分無響應(yīng)④非破壞性檢測，可與其他檢測器串聯(lián)使用等特點及優(yōu)點。既可以用于少量物質(zhì)的分離鑒定，又可用于大量物質(zhì)的分離純化和制備。占據(jù)著生物大分子分離純化技術(shù)的主導(dǎo)地位，使用率占70％左右。傳統(tǒng)核酸蛋白層析分離裝置雖然配有280nm、254nm等波長選擇，但實際使用時只能選定單一波長進行檢測，因此，傳統(tǒng)層析分離裝置只能利用物質(zhì)特征波長分離已知單一組分(蛋白或核酸等)，不能對未知混合組分進行分離，更不能分析蛋白或核酸的純度。目前使用的大分子層析分離裝置由核酸蛋白檢測儀、層析柱、恒流泵、部分收集器和記錄儀等部件構(gòu)成。作為一種簡便的分析分離手段與方法，長期應(yīng)用于教學(xué)實驗、科學(xué)研究和工業(yè)生產(chǎn)。在零點調(diào)整、靈敏度選擇、讀數(shù)換算、使用記錄儀描譜等環(huán)節(jié)的操作基本一樣，且僅在單一波長(280nm或254nm)下檢測。只能利用物質(zhì)特征波長分離已知單一組分(蛋白或核酸)，不能對未知混合組分進行分離，更不能分析蛋白或核酸的純度。傳統(tǒng)核酸蛋白檢測儀在操作和技術(shù)上普遍存在以下幾方面不足：1、誤差。儀器檢測的第一數(shù)據(jù)為光透過率值。由于儀器的對數(shù)轉(zhuǎn)換裝置誤差沒能得到很好的校正補償，實際轉(zhuǎn)換結(jié)果存在較大的誤差。雖然要求使用者在進樣前一定要進行零點調(diào)整，方法為：先調(diào)整透過率為100％，然后再調(diào)吸光度為0，使該點(T＝100％，A＝0)兩者符合了朗伯--比爾定律(A＝1g(1/T))。但是，無法保證在測量范圍內(nèi)(一般取0-2A)都符合朗伯--比爾定律。事實上不同點兩者存在著誤差，有的誤差超過50％。因此，儀器檢測的科學(xué)性得不到保證。

2、讀數(shù).傳統(tǒng)檢測儀為保證測量時讀數(shù)在儀器有效測量范圍內(nèi)，在儀器面板上都設(shè)有靈敏度選擇裝置(2.0A、1.0A、0.5A、0.2A、0.1A、0.05A等)，由此會帶來：①當(dāng)對未知樣品濃度不甚了解，不知如何選擇靈敏度，需要反復(fù)摸索；②儀器顯示值不是樣品吸光度值，真正吸光度值是儀器顯示數(shù)與靈敏度的乘積；③如在測量時改變儀器的靈敏度將會帶來嚴重后果(基線變化大).

3、繁瑣。大多傳統(tǒng)檢測儀在不同靈敏下的測量結(jié)果均為0-10mv直流電壓信號，將此信號輸出到記錄儀上，選擇適當(dāng)?shù)挠涗泝x走紙速度，在記錄紙上繪出吸光度譜。可想而知，記錄紙上的吸光度并非樣品吸光度，也受到儀器靈敏度的調(diào)制。要想從記錄紙上得到吸收峰的面積、歸一化等參數(shù)將是一件費工耗時、十分繁瑣的事。再者，紙質(zhì)譜圖提供的信息單一且難以保存，更不能直接在文章中插入使用。

4、單一。傳統(tǒng)檢測儀雖然可能配有280nm、254nm等波長選擇，但使用時只能選定單一波長進行檢測，不能同時進行雙波長(280nm和254nm)同步檢測。因此，傳統(tǒng)層析分離裝置只能利用物質(zhì)特征波長分離已知組分。需進一步分離未知物質(zhì)，傳統(tǒng)層析分離裝置無能為力。

三、實用新型內(nèi)容：

本實用新型目的是：為徹底解決傳統(tǒng)層析分離裝置存在的誤差大、讀數(shù)不直觀、記錄儀描譜、只能單波長檢測等問題。提出一種涉及多波長核酸蛋白層析分離和檢測系統(tǒng)。