[發明專利]豬星狀病毒的熒光定量PCR檢測方法無效
| 申請號： | 200910310225.6 | 申請日： | 2009-11-23 |
| 公開（公告）號： | CN101705310A | 公開（公告）日： | 2010-05-12 |
| 發明（設計）人： | 崔立;華修國;郭偉;商曉桂;單同領 | 申請（專利權）人： | 上海交通大學 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 上海交達專利事務所 31201 | 代理人： | 王錫麟;王桂忠 |
| 地址： | 200240 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 星狀 病毒 熒光 定量 pcr 檢測 方法 | ||
1.一種豬星狀病毒的熒光定量PCR檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：
步驟一，以豬星狀病毒基因的保守片段SEQ?ID?NO：1為靶目標，設計引物和探針，擴增基因片段；
步驟二，利用步驟一所得基因片段構建重組質粒；
步驟三，提取樣品的RNA，逆轉錄得到cDNA；
步驟四，按照常規熒光定量PCR檢測方法檢測樣品中的豬星狀病毒的含量。
2.根據權利要求1所述的豬星狀病毒的熒光定量PCR檢測方法，其特征是，
步驟一和步驟四中，擴增時所使用的引物為：
上游引物：5’-TCCTTTTGTGGCTTTACTGTGAATG-3’，
下游引物：5’-ATGAAGGCAGAAAGCAACTGATAAC-3’。
3.根據權利要求1所述的豬星狀病毒的熒光定量PCR檢測方法，其特征是，
步驟一和步驟四中，擴增時使用的探針為：
5’-(FAM)TGTACCAACCCAGCCAGAGAAGCT(TAMRA)-3’。
4.根據權利要求1所述的豬星狀病毒的熒光定量PCR檢測方法，其特征是，
步驟二中，所述重組載體使用的質粒是pMD18-T。
5.根據權利要求1所述的豬星狀病毒的熒光定量PCR檢測方法，其特征是，
步驟四中，所述熒光定量PCR檢測方法中，PCR單個循環為：95℃預變性3min；95℃變性10s，55℃退火40s，72℃延伸40s。
6.根據權利要求5所述的豬星狀病毒的熒光定量PCR檢測方法，其特征是，
步驟四中，所述熒光定量PCR檢測方法中，共40個PCR單個循環。
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