[發明專利]具有分子內親合力效應的人IgA免疫球蛋白結合分子

無效

• 申請號: 200910247716.0
• 申請日: 2009-12-30
• 公開（公告）號: CN102115497A
• 公開（公告）日: 2011-07-06
• 發明（設計）人: 潘衛;曹潔;溫宗梅;陳秋莉;蔣少華;王錦紅;戚中田
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K1/14;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/70;C12N15/74;C12N1/21;C40B30/04;C12Q1/68;G01N33/53
• 代理公司: 上海光華專利事務所 31219
• 代理人: 許亦琳;余明偉

1.一種具有分子內親合力效應的人IgA免疫球蛋白結合分子，它是SEQ?ID?NO：5～9中任一所示的氨基酸序列的蛋白，或其保守性變異蛋白。

2.一種分離的多核苷酸，所述多核苷酸編碼權利要求1中所述的具有分子內親合力效應的人IgA免疫球蛋白結合分子。

3.如權利要求2中所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸具有如SEQ?ID?NO：10～14中任一所示的核苷酸序列。

4.一種表達載體，其特征在于，所述表達載體表達權利要求1中所述的具有分子內親合力效應的人IgA免疫球蛋白結合分子，且所述表達載體含有如權利要求2或3中任一所述的多核苷酸以及與該多核苷酸序列操作性相連的表達調控序列。

5.如權利要求4中所述的表達載體，其特征在于，所述表達載體為原核表達載體。

6.一種宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞被權利要求4-5中任一權利要求所述的表達載體所轉化。

7.如權利要求6所述的宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞為原核細胞。

8.權利要求1中所述具有分子內親合力效應的人IgA免疫球蛋白結合分子的制備方法，包括如下步驟：合成編碼權利要求1中所述的人IgA免疫球蛋白結合分子的多核苷酸，將此多核苷酸序列構建至表達載體中，然后將含有編碼權利要求1中所述的人IgA免疫球蛋白結合分子的多核苷酸的表達載體轉化至宿主細胞中誘導表達，通過親和層析制備所述具有分子內親合力效應的人IgA免疫球蛋白結合分子。

9.一種具有分子內親合力效應的人IgA免疫球蛋白結合分子的定向進化篩選方法，包括如下步驟：

1)以hIgA親和體SEG1和SEG2序列作為基本結構單元，分別在其3′端引入長度為3個氨基酸的隨機連接肽序列，構建噬菌體展示hIgA親和體隨機組合文庫；

2)以hIgA分子為篩選配基，通過生物淘洗方法，對步驟1)中得到的噬菌體展示hIgA親和體隨機組合文庫進行多輪篩選；

3)用PCR方法檢測每輪篩選后各代噬菌體文庫插入片段的分布情況，用PCR方法檢測每輪篩選后各代噬菌體文庫插入片段的分布情況，分析每輪篩選后噬菌體中含有的hIgA親和體重復片段的數量以及含有不同數量hIgA親和體重復體片段的噬菌體克隆的百分比；

4)隨機挑取含有不同數量hIgA親和體重復體片段的噬菌體克隆進行鑒定，經酶聯免疫吸附檢測上述噬菌體克隆與hIgA的結合能力；

5)測定含有不同數量hIgA親和體重復體片段的陽性單克隆噬菌體的DNA序列，推導所含外源氨基酸序列；

6)篩選獲得的hIgA親和體序列克隆至表達載體，轉化受體菌，經誘導表達并純化表達蛋白；

7)經ELISA檢測、Westernblot試驗以及表面等離子共振檢測，篩選出與hIgA具有最高結合能力的hIgA親和體重復體。

10.權利要求1中所述具有分子內親合力效應的人IgA免疫球蛋白結合分子在高效特異性IgA的純化和檢測中的應用。