[發明專利]一種組織工程微囊化肝細胞及其制備方法和應用無效
| 申請號: | 200910241907.6 | 申請日: | 2009-12-15 |
| 公開(公告)號: | CN101717767A | 公開(公告)日: | 2010-06-02 |
| 發明(設計)人: | 王常勇;邱麗媛;段翠密;王滟濛;林秋霞 | 申請(專利權)人: | 中國人民解放軍軍事醫學科學院基礎醫學研究所 |
| 主分類號: | C12N11/10 | 分類號: | C12N11/10;C12N11/08;C12N11/04;A61K35/407;A61K35/12;A61P1/16 |
| 代理公司: | 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246 | 代理人: | 史雙元 |
| 地址: | 100094*** | 國省代碼: | 北京;11 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 組織 工程 微囊化 肝細胞 及其 制備 方法 應用 | ||
1.一種組織工程微囊化肝細胞的制備方法,其特征在于,按照如下操作步驟進行:
(1)將肝細胞和血管內皮細胞以1∶0.5-1的數量比置于質量百分比濃度為1.5-2%的海藻酸鈉水溶液中混合,制成細胞懸液,使每毫升細胞懸液中含有的總細胞數為3-5×106個;
(2)利用高壓靜電微囊發生儀將步驟(1)獲得的細胞懸液噴射到100-120mM的氯化鈣水溶液中,反應12-20min,形成海藻酸鈣膠珠;
(3)將上述海藻酸鈣膠珠洗滌后加入到質量百分比濃度為0.02-0.07%的多聚賴氨酸水溶液中,反應5-10min,自由沉降后,收集沉淀物;
(4)清洗步驟(3)獲得的沉淀物后將其加入到質量百分比濃度為0.02-0.07%的海藻酸鈉水溶液中,反應3-8min,自由沉降后,收集沉淀物;
(5)清洗步驟(4)獲得的沉淀物后將其加入到濃度為45-70mM的檸檬酸鈉水溶液中,反應3-8min,收集沉降物并清洗,從而獲得組織工程海藻酸鈉-多聚賴氨酸-海藻酸鈉微囊化肝細胞。
2.根據權利要求1所述的組織工程微囊化肝細胞的制備方法,其特征在于,所述肝細胞具有90%以上的純度。
3.根據權利要求1所述的組織工程微囊化肝細胞的制備方法,其特征在于,在步驟(2)中將步驟(1)獲得的細胞懸液以200-500μm直徑的膠珠狀態分散。
4.按照權利要求1-3任一所述制備方法獲得的組織工程微囊化肝細胞。
5.權利要求4所述的組織工程微囊化肝細胞在制備肝衰竭藥物方面的應用。
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