[發(fā)明專利]22個基因座的熒光標記復合擴增檢驗系統

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910224287.5
• 申請日: 2009-11-26
• 公開（公告）號: CN101698890A
• 公開（公告）日: 2010-04-28
• 發(fā)明（設計）人: 劉未斌;萬慧榮;夏子芳;杜蔚安;湯文文;熊勇華;鄭衛(wèi)國
• 申請（專利權）人: 無錫中德美聯生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京三高永信知識產權代理有限責任公司 11138
• 代理人: 何文彬

技術領域

本發(fā)明涉及一種熒光標記復合擴增檢驗系統，具體涉及通過復合擴增，檢測人基因組中21個STR基因座和Amelogenin基因座的熒光標記復合擴增檢驗系統，該系統可以廣泛用于公安部門日常檢案、DNA數據庫建立、個體識別、親子鑒定以及考古等方面，有助于解決公安部打拐數據庫一子多父母問題和親子鑒定中突變和近親鑒定問題。

背景技術

短串聯重復序列(STR)是目前普遍應用的遺傳標記，由于它具有片段小容易擴增、適宜于檢驗微量或降解檢材、各基因座的擴增條件相似而能夠實現復合擴增等特點，因而采用STR的檢驗系統具有靈敏、準確、快速、信息量大等優(yōu)點，尤其是在建立DNA數據庫方面，STR復合擴增技術具有極大的優(yōu)越性。因此美國FBI選擇了13個STR基因座用于建立DNA數據庫——CODIS(Combined?DNA?Index?System)：CSF1PO、D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、FGA、TH01、TPOX、vWA。這些STR基因座通常被稱為13個核心基因座。

正是因為STR基因座具備以上優(yōu)點和應用前景，許多科研機構和公司投入了大量經費對其進行開發(fā)性的研究。國內外已有較多基于STR-PCR技術的熒光檢測技術產品：

為了提供一種新的熒光標記復合擴增檢驗系統，使其更適合于中國人群在個體識別和親子鑒定等方面的應用，進一步提高系統的累計個體識別力和累積非父排除率，該檢驗系統中必須包含數目更多的、在中國人群中具有高度遺傳多態(tài)性的STR基因座。

發(fā)明內容

本發(fā)明的一個目的是提供一種22個基因座的熒光標記復合擴增檢驗系統，用于個體識別和親子鑒定。為此，本發(fā)明者對中國人群中STR基因座的遺傳多態(tài)性進行了深入的研究，并以此為依據，開發(fā)了新的STR基因座的5色熒光復合擴增檢驗系統，提供對包括Amelogenin在內的22個基因座的分型結果，提高了系統的累計個體識別力和累積非父排除率。該系統單獨或與其他商品化試劑盒聯合使用，有助于解決公安部打拐數據庫一子多父母、親子鑒定中突變和近親鑒定問題。

本發(fā)明的同時分析人基因組DNA的22個基因座的熒光標記復合擴增系統中，所涉及的22個基因座為：Amelogenin、D6S474、D12ATA63、D22S1045、D10S1248、D1S1677、D11S4463、D1S1627、D3S4529、D2S441、D6S1017、D4S2408、D19S433、D17S1301、D1GATA113、D18S853、D20S482、D14S1434、D9S1122、D2S1776、D10S1435和D5S2500。

本發(fā)明的熒光標記復合擴增系統還涉及在一個體系中同時擴增22個基因座，將22個基因座分為四組并分別用四種不同的熒光染料FAM、HEX、TAMRA、ROX進行標記。

本發(fā)明的熒光標記復合擴增系統優(yōu)選的一種分組及熒光染料標記方式為：FAM標記的Amelogenin、D6S474、D12ATA63、D22S1045、D10S1248、D1S1677和D11S4463為一組；HEX標記的D1S1627、D3S4529、D2S441、D6S1017、D4S2408和D19S433為一組；TAMRA標記的D17S1301、D1GATA113、D18S853、D20S482和D14S1434為一組；ROX標記的D9S1122、D2S1776、D10S1435和D5S2500為一組。

本發(fā)明所采用的22個基因座分別采用位于該基因座核心重復區(qū)兩側的一對引物進行擴增，其中每對引物中有一條引物的5’端進行熒光染料標記；本發(fā)明還提供用于復合擴增22個基因座的寡核苷酸引物混合物。

本發(fā)明的系統中包括每個基因座的等位基因標準物，以確定待檢DNA樣品中各個基因座的基因型；本發(fā)明的系統中包含的用于鑒別DNA樣品性別的基因座是Amelogenin基因座。

本發(fā)明的擴增采用聚合酶鏈式反應進行，擴增產物的檢測方法采用多道或單道毛細管電泳。

本發(fā)明的熒光標記復合擴增檢驗系統適用于：人的精斑、唾液斑、組織、血痕或血液等檢材來源DNA樣品的檢測分析。

為實現本發(fā)明的上述目的，采用如下技術方案：

一、基因座的確定