[發明專利]一種用金磁微粒純化總核酸的方法

有效

• 申請號: 200910219125.2
• 申請日: 2009-11-25
• 公開（公告）號: CN101724625A
• 公開（公告）日: 2010-06-09
• 發明（設計）人: 崔亞麗;張景閣;安德魯·G·陳;劉蓓
• 申請（專利權）人: 陜西北美基因股份有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 西安智邦專利商標代理有限公司 61211
• 代理人: 徐平

1.一種用金磁微粒純化總RNA的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）制備含有總核酸的樣品裂解液

1.1）取50?mg?鼠肝臟組織樣本放入玻璃勻漿器，加入1?ml?鋰鹽 裂解液勻漿；該鋰鹽裂解液含3?M的LiCl；

1.2）將樣品裂解液移入離心管中，置于冰上備用；

2）結合

2.1）取100μl?金磁微粒于另一離心管中，將其置于磁性分離器上磁 性分離直至上清澄清，棄去上清液；

2.2）取下離心管，向離心管中加入600μl?結合緩沖液，混勻備用； 該結合緩沖液含1?M的NaCl和10?%（W/V）的聚乙二醇，其中聚乙二 醇的分子量是8000；

2.3）用移液器移取步驟1.2）的樣品裂解液300μl加入步驟2.2）的離 心管中，吹吸混勻，室溫靜置5?min，然后將該離心管置于磁性分離 器上，磁性分離至上清澄清，棄去上清液；

3）清洗

取下離心管，向離心管中加入600μl?濃度為75?%（V/V）的乙醇溶 液，吹吸混勻，將其置于磁性分離器上，棄去上清液，室溫晾干5?m in；

4）消化

向離心管中加入85μl?無核酸酶水、10μl?RDD?buffer和5μl?D Nase，吹吸混勻，室溫靜置15?min；

5）再結合

向離心管中加入600μl結合緩沖液吹吸混勻，室溫靜置2?min；將離 心管置于磁性分離器上，磁性分離至上清澄清，棄去上清液；該結合 緩沖液含1?M的NaCl和10?%（W/V）的聚乙二醇，其中聚乙二醇的分 子量是8000；

6）清洗

重復步驟3）兩次，室溫晾干5?min；

7）洗脫

向離心管中加入200?μl無核酸酶水，吹吸混勻，室溫靜置5?min； 然后將離心管置于磁性分離器上分離至上清澄清；所得上清液即為從 鼠肝臟組織樣本中純化得到的總RNA溶液。