[發明專利]基于珠母貝外套膜分泌物的珍珠質基質蛋白及其制備方法

無效

• 申請號: 200910219086.6
• 申請日: 2009-11-20
• 公開（公告）號: CN101704887A
• 公開（公告）日: 2010-05-12
• 發明（設計）人: 張榮慶;謝莉萍;劉曉軍;周玉娟;李琪
• 申請（專利權）人: 清華大學
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K1/14
• 代理公司: 西安智大知識產權代理事務所 61215
• 代理人: 賈玉健

1.一種基于珠母貝外套膜分泌物的珍珠質基質蛋白，其特征在于，該珍珠質基質蛋白采用以下步驟制備得到：

步驟1：將珠母貝外套膜的邊緣深色帶與中心部分分離，然后，將外套膜的中心部分從珠母貝的貝體上分離，得到外套膜原料；

步驟2：將步驟1中得到的外套膜原料放入PBS溶液中浸泡，在0℃～4℃的低溫下，浸泡3小時～6小時，將得到的溶液以15000轉每分鐘的轉速進行離心分離，收集離心分離的上清液，得到外套膜分泌液；

步驟3：將步驟2得到的外套膜分泌液進行超濾和透析除鹽濃縮，得到濃縮液；

步驟4：將步驟3得到的濃縮液進行冷凍干燥，制得總的珍珠質基質蛋白，

或，先將步驟3得到的濃縮液進行冷凍干燥，制得總的珍珠質基質蛋白，然后，對該總的珍珠質基質蛋白進行離子交換柱層析，收集280nm下有吸收峰的蛋白組分，采用十二烷基磺酸鈉-聚丙酰胺凝膠電泳分析收集的蛋白組分，再將該蛋白組分進行高效液相分離，并收集280nm下有吸收峰的單一蛋白組分，之后，將該單一蛋白組分進行冷凍干燥，制得單一珍珠質基質蛋白。

2.按照權利要求1所述的珍珠質基質蛋白，其特征在于，所述步驟2中PBS溶液的體積為外套膜原料體積的500倍～1000倍。

3.按照權利要求1所述的珍珠質基質蛋白，其特征在于，所述步驟3中濃縮液的截留分子量為3KD。

4.按照權利要求1所述的珍珠質基質蛋白，其特征在于，所述步驟4中進行離子交換柱層析時采用的填料為Sephadex?G-75葡聚糖凝膠，流動相為Tris-HCl溶液。

5.按照權利要求1所述的珍珠質基質蛋白，其特征在于，所述步驟4中進行液相分離時采用的填料為C18顆粒，流動相為0％～100％之間梯度遞增的乙腈水溶液。

6.一種權利要求1所述珍珠質基質蛋白的制備方法，其特征在于，該方法具體按以下步驟進行：

步驟1：將珠母貝外套膜的邊緣深色帶與中心部分分離，然后，將外套膜的中心部分從珠母貝的貝體上分離，得到外套膜原料；

步驟2：將步驟1中得到的外套膜原料放入PBS溶液中浸泡，在0℃～4℃的低溫下，浸泡3小時～6小時，將得到的溶液每分鐘15000轉的轉速進行離心分離，收集離心分離的上清液，得到外套膜分泌液；

步驟3：將步驟2得到的外套膜分泌液進行超濾和透析除鹽濃縮，得到濃縮液；

步驟4：將步驟3得到的濃縮液進行冷凍干燥，制得總的珍珠質基質蛋白，

或，先將步驟3得到的濃縮液進行冷凍干燥，制得總的珍珠質基質蛋白，然后，對該總的珍珠質基質蛋白進行離子交換柱層析，收集280nm下有吸收峰的蛋白組分，采用十二烷基磺酸鈉-聚丙酰胺凝膠電泳分析收集的蛋白組分，再將該蛋白組分進行高效液相分離，并收集280nm下有吸收峰的單一蛋白組分，之后，將該單一蛋白組分進行冷凍干燥，制得單一珍珠質基質蛋白。

7.按照權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述步驟2中PBS溶液的體積為外套膜原料體積的500倍～1000倍。

8.按照權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述步驟3中濃縮液的截留分子量為3KD.

9.按照權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述步驟4中進行離子交換柱層析時采用的填料為Sephadex?G-75葡聚糖凝膠，流動相為Tris-HCl溶液。

10.按照權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述步驟4中進行液相分離時采用的填料為C18顆粒，流動相為0％～100％之間梯度遞增的乙腈水溶液。