[發(fā)明專利]醫(yī)用級(jí)Ⅲ型膠原的制備方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910216686.7
• 申請(qǐng)日: 2009-12-11
• 公開（公告）號(hào): CN101717804A
• 公開（公告）日: 2010-06-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蔣波;李霞;陳露;萬法盛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川大學(xué)
• 主分類號(hào): C12P21/06
• 分類號(hào): C12P21/06;C07K14/78;A61K38/39;A61L27/24
• 代理公司: 成都科海專利事務(wù)有限責(zé)任公司 51202
• 代理人: 鄧?yán)^軒

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種醫(yī)用級(jí)III型膠原的制備方法，屬于生物醫(yī)用材料的制備領(lǐng)域。

背景技術(shù)

III型膠原(Type?III?Collagen，CIII)是一種典型的間質(zhì)膠原，主要存在于皮膚、血管、 心臟、肺、肝臟及腎臟等的組織中。以細(xì)纖維形式存在的III型膠原賦予組織較強(qiáng)的可擴(kuò)張 能力，對(duì)保持皮膚、血管、肝臟等組織器官的彈性，維持其正常的生理功能起著重要的作 用。近年來的研究表明，III型膠原在Ehlers-Danlos綜合癥IV(EDS?IV)和動(dòng)脈瘤的病理研 究中起著重要的作用(Kroes?HY，Pals?G?and?van?Essen?AJ.Ehlers-Danlos?syndrome?type?IV： unusual?congenital?anomalies?in?a?mother?and?son?with?a?COL3A1?mutation?and?a?normal collagen?III?protein?profile.Clin?Genet.2003：63：224-227和Brega?KE，Seltzer?WK，Munro?L， Breeze?RE.Genotypic?variations?of?type?III?collagen?in?patients?with?cerebral?aneurysms.Surg Neurol.1996：46：253-7)。同時(shí)，III型膠原還用于抗血清的制備和免疫組織化化學(xué)的研究(S. Gay，L.?Balleisen，K.Remberger，P.P.Fietzek，B.C.Adelmann?and?K.Kühn. Immunohistochemical?Evidence?for?the?Presence?of?Collagen?Type?III?in?Human?Arterial?Walls， Arterial?Thrombi，and?in?Leukocytes，Incubated?with?Collagen?in?Vitro.Klin.Wschr，1975， 53：899-902)。并且，國(guó)內(nèi)外均有關(guān)于III型膠原蛋白促進(jìn)胃粘膜上皮細(xì)胞再生及胃粘膜損 傷組織修復(fù)的報(bào)道(王韋.III型膠原對(duì)利血平誘發(fā)大鼠潰瘍的治療作用.第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué) 報(bào)，1993，14：472和Rattner?DW，Rnteen?IM，Silen?W.A?rapid?method?for?culturing?guinea?pig gastric?mucous?cell?monolayers.In?Vitro，1985；21：453)等等。III型膠原作為一種伴生膠原， 通常與I型膠原共存(如在真皮中，III型膠原約占皮膠原總量的10％-15％；在許多腱組織 中，III型膠原的含量較少，大約占5％，而在膝關(guān)節(jié)的韌帶中，III膠原的含量稍多，大約占 9％-10％。)，在組織工程支架、藥品、病理學(xué)等領(lǐng)域有廣泛應(yīng)用，因此建立一套操作簡(jiǎn)便、 成本低、產(chǎn)品純度高的醫(yī)用級(jí)III型膠原制備方法有著十分重要的意義。

由于III型膠原是伴隨著I型膠原出現(xiàn)的，從真皮或粗制I型膠原(未分離出III型膠原 的I型膠原)中分離出高純度的III型膠原一直是人們努力的方向。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)外常用的分離 純化III型膠原的方法是鹽析法和柱層析法。鹽析法是雖然操作簡(jiǎn)單、成本低，但純化程度 也較低。DEAE-纖維素柱離子交換層析法能除去III型膠原中的非膠原蛋白和前膠原，但對(duì) 于I型膠原和III型膠原的分離作用不大。高效液相離子交換柱層析法、CM-纖維素柱層析 法和瓊脂糖分子篩凝膠過濾柱層析法隨純化程度高，但產(chǎn)量低、操作復(fù)雜，因此受到的限 制因素更多。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足而提供一種醫(yī)用級(jí)III型膠原的制備方法，其特點(diǎn) 是該方法制備III型膠原耗時(shí)短、純度高、理化性穩(wěn)定、生物活性好滿足生物醫(yī)用材料、病 理學(xué)研究和藥品等領(lǐng)域的要求。

本發(fā)明的目的由以下技術(shù)措施實(shí)現(xiàn)，其中所述原料份數(shù)除特殊說明外均為重量份數(shù)。

III型膠原的制備方法包括以下步驟：

1、新生犢牛皮的前處理