[發明專利]一種抗原遞呈細胞靶向納米粒子及其制備方法

無效

• 申請號: 200910201415.4
• 申請日: 2009-12-18
• 公開（公告）號: CN101716345A
• 公開（公告）日: 2010-06-02
• 發明（設計）人: 崔京浩;陳莉;朱麗
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: A61K47/36
• 分類號: A61K47/36;A61K47/26;A61K38/38;A61K38/25;A61K38/24;A61K38/21;A61K38/20;A61K38/19;A61K38/09
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技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及一種抗原遞呈細胞(包括巨噬細胞和樹突狀細胞)靶向納米粒子及其制備方法，其特征在于該納米粒是甘露糖通過化學反應連接到殼聚糖上，再采用復乳法(W/O/W)制備PLGA納米粒，通過該法制得的納米粒粒徑在200-500nm之間，分布較窄，載藥量約為6-10％，具有明顯的靶向抗原遞呈細胞和緩釋性能。

背景技術

固有免疫(innate?immunity)又稱天然免疫(natural?immunity)，是指機體與生俱來的抵抗外來病原體侵襲清除體內抗原異物的一系列預防能力。固有免疫的作用由體內長期進化形成的固有免疫系統(innate?immunity?system)所執行，包括固有免疫屏障，分子和細胞。其中固有免疫細胞包括吞噬細胞、樹突狀細胞、自然殺傷細胞、自然殺傷T細胞、γδT細胞和B1細胞等，是固有免疫的主要執行者。

其中激活的巨噬細胞可以識別、結合然后殺傷腫瘤細胞，在抗腫瘤上發揮著重要的作用。巨噬細胞表面具有特異性的甘露糖受體(MMR)表達，甘露糖受體屬于C型凝集素超家族，可快速循環于細胞膜和早期內體(early?endosome)間，在較短的時間內即可內化大量模型抗原，誘導免疫應答反應。Mulller[C.D.Muller，F.Schuber，Neo-mannosylated?liposomes：synthesis?and?inte-raction?with?mouse?kupffer?cells?and?resident?peritoneal?macrophages，Biochim.Bio-phys.Acta?Ser.Biomembr.986(1989)97-105.]等人研究了新型的甘露糖修飾的脂質體與Kupffer細胞和腹腔巨噬細胞之間的作用，結果表明甘露糖修飾的脂質體與未修飾的脂質體相比能使巨噬細胞的攝取增加2-4倍。

聚乳酸-聚乙醇酸的共聚物(PLGA)系生物可降解性合成高分子，具有安全性高、生物相容性好、藥物釋放速度隨聚合物比例和分子量的不同調整的特點，成為迄今為止研究最多、獲得FDA批準上市的生物可降解材料。而殼聚糖為自然界貯量豐富而且是唯一帶正電荷的具有生物可降解、吸附性和安全性好的高分子材料，目前也是廣泛應用于藥物和基因給藥的載體研究的材料。

發明內容

本發明公開了一種巨噬細胞靶向納米粒子及其制備方法，其特征在于該納米粒是甘露糖通過化學反應連接到殼聚糖上，再采用復乳法(W/O/W)制備PLGA納米粒，通過該法制得的納米粒粒徑在200-500nm之間，分布較窄，載藥量約為6-10％，具有明顯的靶向抗原遞呈細胞和緩釋性能，其中殼聚糖的分子量為8000-10000道爾頓，脫乙酰度大于90％；PLGA，分子量為20000-40000道爾頓，PLA∶PGA比例為：50∶50-25∶75，PLGA濃度為10mg/mL-50mg/mL；甘露糖修飾的殼聚糖的濃度為0.5％-5％。

本發明的巨噬細胞的靶向納米粒，包裹的藥物為蛋白類藥物，包括：卵白蛋白、促黃體激素、曲普瑞林、亮丙瑞林、布舍瑞林、生長激索釋放因子、促甲狀腺激索釋放激索、白介索-2、a一于擾素、腫瘤壞死因子、粒細胞巨噬細胞集落刺激因子中的一種。

本發明甘露糖修飾的殼聚糖的合成合成路線具體步驟如下：

(1)氯化鋅加入乙酸酐，加熱使ZnCl₂溶解。加入D-甘露糖加熱反應，乙酸乙酯萃取，蒸去溶劑，得到全乙酰化甘露糖(產物1)。

(2)紅磷懸浮于乙酸中，滴加溴，控制溫度低于15℃。滴加完畢，室溫繼續攪拌至紅磷完全溶解，過濾，母液低溫保存，將全乙酰化甘露糖(產物1)分批加入到上述的溴代試劑中，室溫攪拌，氯仿萃取，過柱，除去溶劑得到溴代四乙酰甘露糖(產物2)。

(3)羥基苯甲醛、四正丁基溴化銨加入三氯甲烷溶液中，再加入含溴代四乙酰基甘露糖的三氯甲烷溶液，反應結束后用二氯甲烷萃取三次，過柱，除去溶劑，得白色固體，1-對羥基苯基四乙酰甘露糖(產物3)。

(4)將1-對羥基苯基四乙酰甘露糖(產物3)懸浮于無水乙醇中，加入0.2N乙醇鈉溶液。加熱回流，減壓濃縮、冷卻，有白色固體析出，抽濾，冷乙醇洗滌，得1-對羥基苯基甘露糖(產物4)。