[發(fā)明專利]Ⅱ型副流感病毒熒光定量PCR試劑盒及其檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910198902.X
• 申請日: 2009-11-17
• 公開（公告）號: CN102061340A
• 公開（公告）日: 2011-05-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 沈維祥;何劍軍;吳大治;夏懿
• 申請（專利權(quán)）人: 上海復星醫(yī)學科技發(fā)展有限公司;上海復星醫(yī)藥(集團)股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬病原體核酸檢測領(lǐng)域，特別涉及一種II型副流感病毒熒光定量PCR檢測試劑盒，同時，本發(fā)明還涉及一種熒光定量PCR試劑盒檢測II型副流感病毒的方法，熒光定量PCR是通過實時監(jiān)控收集PCR體系中的熒光信號，對樣品中的初始模板進行定量，可廣泛應用于醫(yī)學、生物學等相應領(lǐng)域。

背景技術(shù)

副流感病毒(parainfluenza?virus，PIV)，與流感病毒同屬粘病毒。1992年第四次國際病毒命名委員會將其劃歸副粘病毒科(paramyxiviridae)，副粘病毒亞科(paranyxivirinae)。其成員多數(shù)是引起人畜共患病的重要病原體。近年來又發(fā)現(xiàn)一些新現(xiàn)病毒如megamyxoviruses(Hendra?and?Nipah?viruses)以及metapneumovirus。

副流感病毒是幼兒、兒童和成人的顯著上呼吸道感染最常見的病原體，據(jù)統(tǒng)計，大約30％～40％的嬰幼兒急性呼吸道感染都是由人副流感病毒(human?parainfluenzavirus，HPIV)引起的。和呼吸道合孢病毒一樣，副流感病毒可以重復感染。副流感病毒分為一至四型，每種亞型都有不同的臨床和流行病學特點。一型和二型副流感病毒是兒童哮吼癥的主要原因，在2-4歲兒童中癥狀最嚴重。一型和二型副流感病毒也可導致其他上/下呼吸道病癥。二型副流感病毒較少發(fā)現(xiàn)。三型副流感病毒雖然也導致哮吼癥，但是它作為僅次于呼吸道合孢病毒的幼兒支氣管炎、肺炎的病原體更為人熟知。三型副流感病毒在1歲以下兒童中癥狀最嚴重。四型副流感病毒一般引起輕微上呼吸道疾病。

副流感病毒根據(jù)遺傳性與抗原性，HPIV可分為4種血清型HPIV?1～4。其中HPIV4又可分為A、B兩個亞型。病毒有包膜，包膜上有兩種刺突，一種是HN蛋白，具有HA和NA的作用；另一種是F蛋白，具有使細胞融合及溶解紅細胞的作用，它由F1和F2亞基通過2個二硫鍵連接而成。病毒包膜內(nèi)為核衣殼，也稱RNP核心，由病毒RNA(vRNA)，N蛋白，P蛋白和L蛋白組成。副流感病毒基因組由不分節(jié)段的ssRNA組成，包括約15，500個核苷酸，編碼至少6種常見的結(jié)構(gòu)蛋白(3’-N-P-C-M-F-HN-L-5’)。研究發(fā)現(xiàn)，HN糖蛋白很可能以四聚體形式存在于HPIV包膜和被感染細胞的胞膜上，通過唾液酸受體使病毒吸附于宿主細胞表面，發(fā)揮神經(jīng)氨酸酶活性。Moscona和Paluso的實驗表明，HN與細胞受體的相互作用是特異而復雜的，它涉及HN和F這兩種表面糖蛋白，且因HPIV型別的不同而多有變化，因此，人副流感病毒血清型可根據(jù)HN基因進行分型。

目前副流感病毒的臨床檢測常用分離培養(yǎng)、免疫熒光試驗、酶聯(lián)免疫反應和PCR等方法；病原體分離培養(yǎng)法雖然有“金標準”之稱，但其技術(shù)復雜、費時長，而且其靈敏度容易受病原體不穩(wěn)定的影響，不適合用于早期診斷。而免疫熒光試驗、酶聯(lián)免疫反應等方法由于特異性差、敏感性低等問題在臨床應用價值受限。普通PCR只能定性或半定量檢測，無法評價治療方案的效果，且操作步驟繁瑣，技術(shù)要求高，易造成產(chǎn)物污染，出現(xiàn)假陽性，無法標準化，不利于推廣。