[發明專利]一種單增李斯特菌溶血素O的原核表達及純化方法無效
| 申請號： | 200910197413.2 | 申請日： | 2009-10-20 |
| 公開（公告）號： | CN101691582A | 公開（公告）日： | 2010-04-07 |
| 發明（設計）人： | 唐雪明;孫曉飛;趙凱;朱宏;吳瀟;譚芙蓉;王金斌;陶世如;蔣玲曦 | 申請（專利權）人： | 上海市農業科學院 |
| 主分類號： | C12N15/70 | 分類號： | C12N15/70;C12P21/02;G01N33/68;C12R1/19;C12R1/01 |
| 代理公司： | 上海開祺知識產權代理有限公司 31114 | 代理人： | 費開逵 |
| 地址： | 201106 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 李斯特 溶血 表達 純化 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種單增李斯特菌溶血素O的原核表達方法，包括以下步驟：
1)根據NCBI上登錄的單增李斯特菌的基因序列，以及所要連接的載體PMD?18-T的多克隆位點設計引物，進行PCR擴增、電泳和回收，并對該PCR回收物進行DNA連接反應；
2)大腸桿菌感受態細胞的制備和轉化；
3)堿法小量制備質粒DNA；
4)表達質粒的重組構建、重組菌的誘導表達。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述引物序列如下：正向引物Hly-F：5’-GCGTCGAC(SalI)CCAATTGCGCAACAAACTGA-3’反向引物Hly-R：5’-CCCTCGAG(Xho?I)TTTTGCGGAACCACCGTAA-3’。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述大腸桿菌感受態細胞為E.coli?DH5α和E.coilBL21(DE3)。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，通過Ni-NTA親和層析進行表達蛋白的進一步純化。
5.根據權利要求1所述的單增李斯特菌溶血素O蛋白在金標速測卡中的應用。
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