[發(fā)明專利]11個用于預測原發(fā)性肝癌是否轉移的microRNA標志物

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910194813.8
• 申請日: 2009-08-31
• 公開（公告）號: CN102002492A
• 公開（公告）日: 2011-04-06
• 發(fā)明（設計）人: 何祥火;魏霖;梁琳慧;顧健人
• 申請（專利權）人: 上海市腫瘤研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/63;C12Q1/68;C40B40/06
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 徐迅

技術領域

本發(fā)明涉及生物技術領域，更具體地，本發(fā)明涉及一類可用于預測原發(fā)性肝癌是否轉移的microRNA標志物以及用途。本發(fā)明還涉及檢測所述microRNA標志物的芯片和試劑盒。

背景技術

原發(fā)性肝癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，每年新發(fā)病例約占全球50％。肝癌的惡性程度高，發(fā)展迅速，治療困難，病死率高。因此，肝癌的盡早診斷就愈發(fā)顯得迫切。

任何事物的發(fā)生發(fā)展都處于內(nèi)外因共同作用之下，內(nèi)因為主，外因為輔。基因作為生命的遺傳介質(zhì)，在生物體的生、老、病、死中處于基礎內(nèi)因的地位。絕大部分基因通過轉錄生成核糖核酸，再翻譯生成蛋白質(zhì)而發(fā)揮生物學功能。

microRNA(miR或miRNA，微小RNA)是一類在較高等的真核生物體內(nèi)廣泛存在的，長度約18-26個堿基的單鏈RNA分子。它可以通過堿基配對原則特異性地與一些mRNA上的靶位點相結合，引起靶mRNA降解或翻譯抑制，進而在轉錄后水平對靶基因進行調(diào)控。

microRNA來源于長度約為1000bp的長鏈RNA初始轉錄產(chǎn)物(Pri-miRNA)，Pri-miRNA分子在細胞核中經(jīng)Drosha酶剪切形成長度約60～80nt的具有莖環(huán)結構的miRNA前體(Pre-miRNA)。Pre-miRNA轉運至胞質(zhì)后，被Dicer酶進一步切割成長約22nt的雙鏈miRNA。雙鏈miRNA解開后，成熟的miRNA進入RNA誘導基因沉默復合物(RNA-induced?silencing?complex，RISC)，與互補mRNA完全或不完全配對，降解靶mRNA或阻遏其表達。

盡管microRNA在細胞總RNA中所占的比重很小，但由于它可以高效地對所有具有靶位點的mRNA產(chǎn)生調(diào)控作用，microRNA在生物體的發(fā)育乃至腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程所起的作用仍不可小視。

然而，迄今為止，本領域?qū)τ谂c腫瘤(如肝癌)相關的microRNA了解甚少，因此本領域迫切需要進一步地分離各種microRNA，尤其是與腫瘤的發(fā)生、轉移、復發(fā)或檢測有關的microRNA。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的就是提供一類新的、可用于預測原發(fā)性肝癌是否轉移的microRNA標志物。

本發(fā)明的另一目的就是提供所述microRNA標志物的用途。

在本發(fā)明的第一方面，提供了一種分離的miRNA，所述的miRNA選自：

(i)序列如SEQ?ID?NO：n所示的miRNA，其中n為選自1-11的正整數(shù)；或

(ii)與SEQ?ID?NO：n所示序列互補的miRNA。

在另一優(yōu)選例中，所述的miRNA分離自人。

在本發(fā)明的第二方面，提供了一種miRNA集(set)或組合(combination)，所述的集或組合由序列如SEQ?ID?NO：1-11所示的11種miRNA所構成。

在本發(fā)明的第三方面，提供了一種分離的或人工構建的前體miRNA，所述的前體miRNA能在人細胞內(nèi)剪切并表達成本發(fā)明第一方面中所述的miRNA。

在本發(fā)明的第四方面，提供了一種分離的多核苷酸，所述的多核苷酸能被人細胞轉錄成前體miRNA，所述的前體miRNA能在人細胞內(nèi)被剪切且表達成本發(fā)明第一方面中所述的miRNA。

在另一優(yōu)選例中，所述的多核苷酸具有式I所示的結構：

Seq_正向-X-Seq_反向????式I，

式I中，

Seq_正向為能在人細胞中表達成所述的miRNA的核苷酸序列，

Seq_反向為與Seq_正向基本上互補或完全互補的核苷酸序列；

X為位于Seq_正向和Seq_反向之間的間隔序列，并且所述間隔序列與Seq_正向和Seq_反向不互補，

并且式I所示的結構在轉入人細胞后，形成式II所示的二級結構：

式II，

式II中，Seq_正向、Seq_反向和X的定義如上述，

||表示在Seq_正向和Seq_反向之間形成的堿基互補配對關系。

在本發(fā)明的第五方面，提供了一種載體，它含有本發(fā)明第一方面中所述的miRNA，或第四方面中所述的多核苷酸。