[發(fā)明專利]一種水蛭素的雙水相-反膠束提取法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910194320.4
• 申請(qǐng)日: 2009-11-27
• 公開（公告）號(hào): CN101759802A
• 公開（公告）日: 2010-06-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 苗艷麗;宋文東;王宏波;方富永
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東海洋大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K14/815
• 分類號(hào): C07K14/815;C07K1/14
• 代理公司: 湛江市三強(qiáng)專利事務(wù)所 44203
• 代理人: 龐愛英

1.一種水蛭素的雙水相-反膠束提取法，其特征在于：包括原材料處理、水蛭素粗產(chǎn)品提取及水蛭素粗產(chǎn)品純化步驟，將原材料處理后，加入生理鹽水?dāng)嚢瑁x心得水相和沉淀；取水相備用，沉淀用組織搗碎機(jī)搗成漿狀，加生理鹽水?dāng)嚢瑁x心得水相和沉淀；取水相備用，沉淀再用組織搗碎機(jī)搗成漿狀后，用生理鹽水重復(fù)處理一次；離心，去沉淀取水相；合并3次的水相，加入硫酸鈉使?jié)舛葹?.05mol·L^-1，加入聚乙二醇6000使質(zhì)量濃度為30％，攪拌，離心分離，取上相水溶液，加入無水乙醇攪拌均勻，冷藏過夜，離心取沉淀稱重后溶解于生理鹽水中，用鹽酸溶液調(diào)至pH1.8～2.0得酸性水蛭素提取液。另取正辛烷加入丁二酸-2-乙基己基酯磺酸鈉使?jié)舛冗_(dá)到0.05～0.07mol·L^-1，攪拌，得反膠束提取液。加入相當(dāng)于其體積二分之一的上述酸性水蛭素提取液，攪拌，離心分離，取上相加入1.5～2倍體積pH9.3～9.5的生理鹽水，攪拌，離心取下相，加無水乙醇攪拌均勻，冷藏過夜，離心取沉淀得水蛭素。

2.據(jù)權(quán)利要求1所述的一種水蛭素的雙水相-反膠束提取法，其特征在于：所述的原材料處理是將菲牛蛭鮮活個(gè)體放入80～90℃的熱水中2～3分鐘，迅速撈出，放冷至室溫，瀝至半干；或?qū)⒂?18℃保存的菲牛蛭個(gè)體取出，放至室溫，瀝至半干。將瀝至半干的菲牛蛭個(gè)體于組織搗碎機(jī)中以10000～12000r/min處理5～6分鐘使之成漿狀。

3.據(jù)權(quán)利要求1所述的一種水蛭素的雙水相-反膠束提取法，其特征在于：所述的水蛭素粗產(chǎn)品提取是將預(yù)處理過的漿狀原材料加入2～2.5倍重量的生理鹽水?dāng)嚢?.5～3小時(shí)，離心取水相，沉淀用組織搗碎機(jī)10000～12000r/min處理2～3分鐘搗成漿狀，按漿狀原材料的量加入1.5～2倍生理鹽水，240～300r/min攪拌2～2.5小時(shí)，離心取水相，沉淀再用組織搗碎機(jī)10000～12000r/min處理2～3min搗成漿狀，按漿狀原材料的量加入1～1.5倍生理鹽水?dāng)嚢?～2.5小時(shí)，離心去沉淀，取水相，合并3次的水相，此即為水蛭素粗產(chǎn)品水溶液。

4.據(jù)權(quán)利要求1所述的一種水蛭素的雙水相-反膠束提取法，其特征在于：所述的水蛭素純化是在水蛭素粗產(chǎn)品水溶液中加入硫酸鈉使?jié)舛葹?.05mol·L^-1，加入聚乙二醇6000使質(zhì)量濃度為30％，240～300r/min攪拌30分鐘，離心分離形成上、下相，取上相水溶液，加入2.8～3倍無水乙醇攪拌均勻，冷藏過夜，離心；取沉淀稱重，溶解于4倍重量的生理鹽水中，用0.05mol·L^-1的HCl溶液調(diào)至pH1.8，得酸性水蛭素溶液；另取正辛烷加入丁二酸-2-乙基己基酯磺酸鈉使?jié)舛冗_(dá)到0.05～0.07mol·L^-1，攪拌，得反膠束提取液。加入相當(dāng)于其體積二分之一的酸性水蛭素溶液，攪拌，離心分離，取上相加入1.5～2倍體積pH9.3～9.5的生理鹽水，攪拌，離心取下相，加無水乙醇攪拌均勻，冷藏過夜，離心取沉淀得水蛭素。

5.據(jù)權(quán)利要求4所述的一種水蛭素的雙水相-反膠束提取法，其特征在于：關(guān)鍵試劑優(yōu)選的使用濃度為：丁二酸-2-乙基己基酯磺酸鈉濃度0.06mol·L^-1，生理鹽水pH9.4。