[發明專利]納米疫苗及其制備方法

無效

• 申請號: 200910189540.8
• 申請日: 2009-11-24
• 公開（公告）號: CN102068698A
• 公開（公告）日: 2011-05-25
• 發明（設計）人: 馬軼凡;周冬梅;謝曉芳;莊燕;鄭明彬
• 申請（專利權）人: 深圳先進技術研究院
• 主分類號: A61K47/26
• 分類號: A61K47/26;A61K9/127;A61K39/39;A61P31/00
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 吳平

【技術領域】

本發明涉及一種疫苗及其制備方法，特別涉及一種采用脂質體作為載體的疫苗及其制備方法。

本發明又涉及一種疫苗載體。

本發明還涉及一種可應用于疫苗載體的脂質體復合物。

【背景技術】

疫苗是預防和控制傳染性疾病發生及發展的重要手段。免疫佐劑(又稱非特異性免疫增生劑)則是疫苗中不可或缺的組成成分，能夠有效地促進疫苗誘導的特異性免疫反應。隨著疫苗研究的飛速發展，新型的基因工程疫苗正被廣泛用于疫苗的研制開發。這種疫苗具有純度高、特異性強等優點，但是由于其分子小，免疫原性相對較差，迫切需要結合有效的免疫佐劑，以提高疫苗的免疫效力。過去的數十年來，人們在研究中發現和研制了各種新型的免疫佐劑，然而潛在的安全性及穩定性等因素大大制約了免疫佐劑的推廣使用。

脂質體納米顆粒是由磷脂雙層殼包裹水相核心形成的球形的實體，其結構類似生物膜，是一種生物相容性好且無毒的納米材料。它可包封水溶性和脂溶性藥物，具有減少藥物劑量、緩釋、及靶向性釋放藥物等優點，因而被廣泛用于納米抗腫瘤藥物的開發。此外，納米脂質體也是一種優良的抗原載體，不僅能夠包裹一系列理化性質不同的抗原及免疫佐劑，保護蛋白多肽抗原不被降解，還可以促進抗原呈遞細胞對抗原的吞噬及呈遞，提高機體的特異性免疫反應。基于以上這些優點，脂質體納米顆粒作為一種新型的疫苗載體，正逐漸用于細菌疫苗、病毒疫苗、抗寄生蟲疫苗以及抗腫瘤疫苗等研制開發。

目前最常用的脂質體蛋白疫苗載體是以中性磷脂和膽固醇為主要成分。這類中性脂質體納米顆粒雖是一種優良的蛋白載體，卻并不能直接促進免疫反應。此外，未經修飾的脂質體靶向性差，不能有效地被抗原呈遞細胞(如樹突狀細胞及單核巨噬細胞)攝取。

現有的脂質體疫苗多采用中性脂質體為載體，然而由于中性脂質體本身不能直接促進免疫反應且靶向性差，因此制約了疫苗的免疫效率。采用陽離子脂質取代中性磷脂雖能夠促進免疫反應和抗原呈遞細胞靶向性，過高的表面電荷卻使其具有明顯的細胞毒性。

綜上所述，現有的脂質體應用于疫苗載體，有所缺失，難于滿足需求。

【發明內容】

有鑒于此，有必要針對現有脂質體疫苗載體的缺陷，提出一種新的甘露糖基化的陽離子脂質體復合物，可以作為疫苗載體及應用于疫苗，這種新的脂質體復合物在陽離子脂質中摻入中性磷脂和甘露糖，不但提高了脂質體的免疫佐劑作用和抗原呈遞細胞靶向性，而且明顯減低其細胞毒作用，提供了一種高效無副作用的新型疫苗載體和佐劑，能顯著增強疫苗的免疫效果。

為了實現上述的發明目的，本發明的技術方案如下：

本發明提供了一種甘露糖基化的陽離子脂質體復合物，包括按比例混合的陽離子脂、中性磷脂和甘露糖苷，陽離子脂和中性磷脂的摩爾比為19∶1至2∶18，甘露糖苷與包括陽離子脂和中性磷脂的脂質體的摩爾比為2∶98至20∶80。

優選地，陽離子脂是是帶有正電荷兩性分子，包括帶有正電荷的頭部和疏水尾部，帶正電荷的極性頭部含有氨基、季銨鹽及多胺等胺類基團，而疏水尾部包括飽和或不飽和脂肪酸鏈或膽固醇環。

優選地，陽離子脂包括雙十烷基二甲基溴化銨(Didecyldimethylammoniumbromide，簡稱DDAB)、二油酰三甲基銨丙烷(ioleoyltrimethylammoniumpropane，簡稱DOTAP)、二油酰丙基氯化三甲銨(dioleoylpropyltrimethylammonium，簡稱DOTMA)、二甲氨基乙基氨甲酰基-膽固醇(3-(N-(N′，N′-Dimethylaminoethane)carbamoyl)cholesterol，簡稱DC-Chol)和二油酰磷脂酰膽堿醚(dioleyl?ether?phosphatidylcholine，簡稱DOEPC)中的一種或多種的組合。

優選地，中性磷脂是兩性分子，包括磷酸相連的取代基團(含氨堿或醇類)構成的親水頭和脂肪酸鏈構成的疏水尾，表面靜電荷基本接近0。