[發明專利]一種利用拮抗微生物菌劑修復沙門氏菌污染土壤的方法

無效

• 申請號: 200910181881.0
• 申請日: 2009-07-31
• 公開（公告）號: CN101628296A
• 公開（公告）日: 2010-01-20
• 發明（設計）人: 尹睿;宋德顯;林先貴
• 申請（專利權）人: 中國科學院南京土壤研究所
• 主分類號: B09C1/10
• 分類號: B09C1/10;C12Q1/04;C12N1/20;C12R1/42
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司
• 代理人: 唐建清

1.一種利用拮抗微生物菌劑原位修復沙門氏菌污染土壤的微生物生態學方法，其特征在于方法步驟為：

a.利用無菌濾紙片平板法從被沙門氏菌污染的土壤中分離得到適宜于土壤環境、對沙門氏菌有抑制或殺滅作用的拮抗細菌；

b.拮抗微生物菌株經過如下流程進行發酵：種子液接種→一級培養→二級培養接種→二級擴大培養，得到拮抗細菌菌液；

c.拮抗細菌菌液噴施于沙門氏菌污染土壤，噴施后耙勻。

2.根據權利要求1所述的沙門氏菌污染土壤拮抗微生物原位修復方法，其特征在于方法步驟為：

a.在LB細菌培養基平板上，首先均勻涂布病原菌接種液，然后用滅過菌圓形濾紙片分別蘸取目標拮抗細菌培養液，貼在涂過病原菌的平板上，于培養箱中28℃條件下培養1-3天，挑選具有明顯抑菌圈菌株，對該菌進行記錄，保存；

b.拮抗微生物復合菌劑制備：用無菌接種環將斜面保存菌種，接種至三角瓶無菌液體培養基中搖勻即成菌懸液，30℃，200r/min培養24h，培養得到一級種子液；將一級種子液按其與發酵培養基體積比1∶10的接種量接種到發酵瓶中二級擴大培養48h得到發酵液；

c.利用微生物復合菌劑對沙門氏菌污染土壤進行微生物修復，分對照和添加拮抗微生物復合菌劑2個處理布置土培試驗，置于自然條件下培養，添加拮抗微生物復合菌劑處理和對照均設4個重復，定期采取土樣測定土壤中沙門氏菌存活數量，監測污染土壤中沙門氏菌的數量動態變化；

d.根據溫室土培微生物菌劑修復效果，應用微生物修復方法于田間沙門氏菌污染土壤進行拮抗微生物復合菌劑微生物原位修復，將發酵培養拮抗微生物菌液施加到沙門氏菌污染田間土壤中，每個對照和處理設3個重復，于施加拮抗微生物復合菌劑后定期采集污染土壤0-10cm表層土樣，采用五點采樣法，監測污染土壤中的沙門氏菌的數量動態變化，以監測是否達到治理沙門氏菌污染土壤的效果。