[發(fā)明專利]日本囊對(duì)蝦線粒體cytb基因片段PCR擴(kuò)增引物及鑒別方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910179697.2
• 申請(qǐng)日: 2009-10-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101693919A
• 公開(kāi)（公告）日: 2010-04-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐田軍;王日昕;孟繁星;石戈
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江海洋學(xué)院
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 杭州杭誠(chéng)專利事務(wù)所有限公司 33109
• 代理人: 尉偉敏

1.日本囊對(duì)蝦線粒體cytb基因片段PCR擴(kuò)增引物，其特征在于，所述擴(kuò)增引物為一對(duì)，分別為SEQ?No.1或SEQ?No.2所示的核苷酸序列。

2.日本囊對(duì)蝦福建群體的鑒別方法，其特征在于，所述方法步驟如下：

(1)利用權(quán)利要求1所述的一對(duì)擴(kuò)增引物對(duì)待測(cè)樣品的線粒體DNA中細(xì)胞色素b基因片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

(2)擴(kuò)增產(chǎn)物純化后測(cè)序，其中，核苷酸序列第528位和第534位堿基為G的待測(cè)樣品來(lái)自福建群體。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的鑒別方法，其特征在于，所述步驟(1)中的待測(cè)樣品選自廣東群體、臺(tái)灣群體、浙江群體和福建群體。

4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的鑒別方法，其特征在于，所述步驟(1)中PCR擴(kuò)增的條件為：94℃預(yù)變性4min，94℃變性30sec，50℃退火45sec，72℃延伸45sec；經(jīng)30個(gè)循環(huán)后再在72℃延伸7min。

5.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的鑒別方法，其特征在于，所述步驟(1)中PCR擴(kuò)增的反應(yīng)體系組成為：0.2ml?PCR薄壁管中加入以下組分：10×Buffer?5μL，dNTP各0.2mmol/L，一對(duì)擴(kuò)增引物各0.2μmol/L，Taq?plus?DNA聚合酶2U，DNA模板50-100ng，最后用滅菌的雙蒸水補(bǔ)至50μL。

6.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的鑒別方法，其特征在于，所述步驟(2)中的擴(kuò)增產(chǎn)物純化采用膠回收試劑盒。

7.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的鑒別方法，其特征在于，所述步驟(2)中的測(cè)序采用自動(dòng)測(cè)序儀進(jìn)行雙向測(cè)序。

8.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的鑒別方法，其特征在于，所述步驟(2)中的擴(kuò)增產(chǎn)物序列經(jīng)比對(duì)剪切后分析長(zhǎng)度為552bp。