[發(fā)明專(zhuān)利]一種檢測(cè)尿液中艾普拉唑的代謝產(chǎn)物的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910176625.2
• 申請(qǐng)日: 2009-09-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102023189A
• 公開(kāi)（公告）日: 2011-04-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 施樹(shù)云;周淦;張偉;周宏灝;胡海棠;譚竟
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 麗珠醫(yī)藥集團(tuán)股份有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/02
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/02;G01N30/72;G01N30/78;G01N30/36;G01N30/60
• 代理公司: 北京泛華偉業(yè)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11280
• 代理人: 曹津燕

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于藥物檢測(cè)分析領(lǐng)域，具體涉及一種檢測(cè)尿液中艾普拉唑的代謝產(chǎn)物的方法。

背景技術(shù)

艾普拉唑(2-[(4-甲氧基-3-甲基)-2-吡啶基]甲硫酰基-5-(1H-吡咯-1-基)-1H-苯并咪唑，以前稱(chēng)為IY81149)是由一洋制藥株式會(huì)社(韓國(guó)，首爾)研發(fā)的用于治療消化性潰瘍的新型質(zhì)子泵抑制劑。很多早期的動(dòng)物(例如小鼠、大鼠、犬和豬)體外研究顯示艾普拉唑呈劑量依賴(lài)性顯著抑制反流性食管炎和胃液分泌的發(fā)展，對(duì)動(dòng)物的心血管系統(tǒng)、自主神經(jīng)系統(tǒng)或平滑肌功能的影響很小，表明艾普拉唑是一種有效而且非常安全的抗?jié)兯帯ＥR床研究顯示，胃食管反流病患者服用20mg艾普拉唑比服用20mg奧美拉唑(另一種質(zhì)子泵抑制劑)的抑制胃pH降低的時(shí)間有所延長(zhǎng)，且該抑制時(shí)間的延長(zhǎng)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

藥物代謝試驗(yàn)在新藥研發(fā)和新藥的臨床應(yīng)用中是非常重要的，然而現(xiàn)有的關(guān)于艾普拉唑代謝方面的研究報(bào)道很少，因此以人尿液樣品中艾普拉唑的代謝產(chǎn)物為研究對(duì)象，更進(jìn)一步對(duì)艾普拉唑的藥物代謝動(dòng)力學(xué)進(jìn)行研究是必要的。分離和鑒定代謝產(chǎn)物是一項(xiàng)具有挑戰(zhàn)意義的工作，這是因?yàn)榇x物質(zhì)的量很少。采用由連字符連接的系統(tǒng)是具有較高效率的分離技術(shù)，如HPLC與MS串聯(lián)系統(tǒng)可以進(jìn)行特定的、敏感的檢測(cè)，是克服上述困難的很有成效的方法。但是，對(duì)代謝產(chǎn)物結(jié)構(gòu)的確切闡明，只有MS數(shù)據(jù)是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種檢測(cè)人尿液中艾普拉唑的代謝產(chǎn)物的方法，該方法采用高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用(HPLC-MS/MS)和高效液相-核磁共振聯(lián)用(HPLC-NMR)，并對(duì)照艾普拉唑及其代謝產(chǎn)物的標(biāo)準(zhǔn)品的MS/MS和NMR數(shù)據(jù)，從而鑒定了艾普拉唑經(jīng)口服后在人尿液中的代謝產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種檢測(cè)人尿液中艾普拉唑的代謝產(chǎn)物的方法，該方法包括以下步驟：

(1)向尿液中加入Na₂CO₃溶液進(jìn)行沉淀，取上清液加入含有0.05mol/l銨鹽的二氯甲烷溶液進(jìn)行萃取，有機(jī)相揮干溶劑得樣品；

(2)采用以下條件對(duì)樣品進(jìn)行高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析：

a.高效液相色譜條件：C₁₈反相色譜柱，以0.05mol/l的醋酸銨水溶液和乙腈為混合流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，0～9分鐘內(nèi)0.05mol/l的醋酸銨水溶液與乙腈的體積比為3∶7，9～12分鐘內(nèi)0.05mol/l的醋酸銨水溶液與乙腈的體積比變?yōu)?∶5，12～18分鐘內(nèi)醋酸銨水溶液與乙腈的體積比為5∶5；流速為1.0ml/分鐘；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為306nm；

b.質(zhì)譜條件：電噴霧質(zhì)譜儀；高效液相色譜柱的流出物以5μl/分鐘速度進(jìn)入質(zhì)譜儀；100～400m/z正離子模式全掃描；毛細(xì)管電壓為2500伏；錐孔電壓40伏；氮?dú)鈬婌F流速為500l/小時(shí)；碰撞能量為36電子伏；

(3)采用以下條件對(duì)樣品進(jìn)行高效液相色譜-核磁共振聯(lián)用分析：

高效液相色譜條件與步驟(2)中的相同，除了將0.05mol/l的醋酸銨水溶液中的水替換為氘代水，乙腈替換為氘代乙腈以外，采用停流模式進(jìn)行¹H核磁共振檢測(cè)，核磁共振條件：500兆赫茲核磁共振儀，內(nèi)標(biāo)物為氘代乙腈，采樣時(shí)間為1.5秒，累加次數(shù)為256。

優(yōu)選地，所述高效液相色譜的樣品濃度均為15.7mg/L。

優(yōu)選地，所述高效液相色譜的進(jìn)樣量均為20μL。

在上述的方法中，所述步驟(1)中的Na₂CO₃溶液的濃度優(yōu)選為1mol/L。

優(yōu)選地，所述步驟(1)中的Na₂CO₃溶液與尿液的體積比可以為1∶15～1∶5，所述上清液與含有0.05mol/l銨鹽的二氯甲烷溶液的體積比可以為1∶10～1∶1。更優(yōu)選地，Na₂CO₃溶液與尿液的體積比為1∶10，所述上清液與含有0.05mol/l銨鹽的二氯甲烷溶液的體積比為1∶5。

優(yōu)選地，所述步驟1中的有機(jī)相在40℃下經(jīng)氮?dú)鈸]干溶劑得樣品。

優(yōu)選地，所述高效液相色譜的柱溫均優(yōu)選為30℃。

優(yōu)選地，所述步驟(2)中的質(zhì)譜條件的電離源溫度為120℃，去溶劑化溫度為450℃。

優(yōu)選地，所述的C₁₈反相柱內(nèi)徑為4.6mm，柱長(zhǎng)為200mm，填料粒度為5μm。