[發明專利]心肌肌鈣蛋白I/N?端腦利鈉肽前體/D二聚體三合一測定試劑盒及制法

在審

• 申請號: 201611165645.6
• 申請日: 2016-12-16
• 公開（公告）號: CN106841631A
• 公開（公告）日: 2017-06-13
• 發明（設計）人: 滕志濤;孫寧寧;于鴻翔;劉衍亮;宋璐琳;陳萍萍
• 申請（專利權）人: 威海紐普生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/533;G01N33/543
• 代理公司: 威海科星專利事務所37202
• 代理人: 初姣姣

技術領域：

本發明涉及醫學免疫學中熒光免疫層析技術領域，具體地說是一種能夠快速準確的同時對血漿和全血樣品中心肌肌鈣蛋白I、N-端腦利鈉肽前體、D二聚體等三個心腦血管疾病相關指標進行定量分析的三合一測定試劑盒及制法。

背景技術：

心肌肌鈣蛋白I(Cardiac Troponin I，cTnI)可作為心肌損傷標志物。由于其高度的心肌特異性，對于心肌損傷的高度敏感性及較長的窗口期，不僅成為判定心肌損傷，特別是診斷急性心梗的“金標準”。而且已成為判定冠脈綜合征病人處于心肌損傷風險的最合適的標志物。肌鈣蛋白的升高還作為有力的證據可支持臨床醫生及早做出抗血栓、抗血小板凝集及參與性治療的決定。N端腦利鈉肽前體(NT-proBNP)是由心、腦分泌的一種含32個氨基酸的多肽激素，心室張力增加時，心臟超負荷促進其分泌，在機體中起排鈉、利尿、擴張血管的生理作用。其升高濃度和心衰(急性心衰AHF慢性心衰CHF)嚴重程度相一致。疑似心衰(HF)時，應首選N端腦利鈉肽前體(NT-proBNP)的檢測。N端腦利鈉肽前體(NT-proBNP)陰性有很高的預測價值，可排除心衰的存在。在呼吸困難患者，N端腦利鈉肽前體(NT-proBNP)是一個將發生(HF)的較強預示因子，能有效地鑒別慢性阻塞性呼吸困難和心源性呼吸困難。尤其是在篩選左室功能不良(LVD)以及心肌梗死后危險度評價方面能顯示出明顯優越性。D-二聚體是纖溶酶分解纖維蛋白的產物。只有當纖維蛋白原首先被凝血酶分解產生纖維蛋白多聚體，然后再由纖溶酶分解纖維蛋白多聚體才能生成D-二聚體。D-二聚體主要反映纖維蛋白溶解功能。只要機體血管內有活化的血栓形成及纖維溶解活動，D-二聚體就會升高。心肌梗死，腦梗死，肺栓塞，靜脈血栓形成，手術，腫瘤，彌漫性血管內凝血，感染及組織壞死等均可導致D-二聚體升高。特別對老年人及住院患者，因患菌血癥等病易引起凝血異常而導致D-二聚體升高。纖維D-二聚體是深靜脈血栓(DVT)，肺栓塞(PE)，彌漫性血管內凝血(DIC)的關鍵指標

cTnI/NT-proBNP/D-Dimer聯合檢測對于心衰心梗的綜合判斷具有一定的臨床價值，是優于cTnI/CK-MB/MYO組合的新的急診三項。

免疫分析技術是利用微量抗原與相應的高特異性抗體之間的免疫反應，來檢測如激素、藥物、蛋白質、多肽、酶、腫瘤相關抗原、微生素、病毒、細菌及金屬元素等生物體內活性物質。免疫分析技術包括標記免疫分析、非標記免疫分析和儀器免疫分析。本試劑盒利用的含有稀土元素的羧基乳膠微球標記免疫分析技術是屬于標記免疫分析之一種。

熒光免疫分析(FIA)和放射免疫分析(RIA)自問世以來，經歷了幾十年的發展，但是人們越來越感覺到FIA因自然本地太高，干擾檢測結果；RIA采用同位素標記，對人體有極大危害并給實驗帶來不便。酶免疫分析(EIA)也因酶本身不穩定，受其他影響因素較大，推廣應用受到限制。80年代初，人們開始研究用稀土元素代替熒光物質和同位素標記蛋白質或抗體，將時間分辨技術引入到生物檢測領域，建立了新型的超微量時間分辨熒光免疫分析技術(Time resolved Fluoroimmunoassay，簡稱TrFIA)。該技術采用多學科先進技術，集結了其他免疫分析的特點，在免疫學、分子生物學、細胞學和醫學等領域，取得長足的發展和廣泛應用。

TrFIA利用了具有獨特熒光特性的3價稀土離子及螯合物為示蹤物代替熒 光物質、酶、同位素、化學發光物質，標記抗體、抗原、激素、多肽、蛋白質、核酸探針及生物細胞，待反應體系(如抗原抗體反應、核酸探針雜交、生物素親和素反應以及靶細胞對效應細胞的殺傷效應等)發生后，用TrFIA檢測儀測定反應產物中的熒光強度。根據產物熒光強度和相對熒光強度的比值，判斷反應體系中分析物的濃度，從而達到定量分析。在通常的熒光測定中，由于測試樣品中含有多種熒光成分，背景熒光(來自樣品中的膠體顆粒和溶劑分子引起的散射光以及血清中蛋白質和其他化合物發出的非特異性熒光)強度大、干擾強，成為熒光分析法大范圍推廣的瓶頸。TrFIA之所以能夠成為繼EIA、RIA之后一種新的靈敏的制法，主要取決于鑭系元素獨特的熒光特點、檢測中采用的波長分辨和時間延遲技術以及解離-增強技術。