[發(fā)明專利]乳清蛋白的分離和測定方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 200910161153.3 | 申請日： | 2009-08-06 |
| 公開（公告）號： | CN101613408A | 公開（公告）日： | 2009-12-30 |
| 發(fā)明（設計）人： | 任一平;謝宏;蔡增軒;儲小軍;林曉;黃百芬;張京順 | 申請（專利權）人： | 浙江貝因美科工貿股份有限公司 |
| 主分類號： | C07K14/76 | 分類號： | C07K14/76;C07K14/47;C07K1/16;G01N30/72 |
| 代理公司： | 北京集佳知識產權代理有限公司 | 代理人： | 陳劍華 |
| 地址： | 310000浙江省杭州*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 蛋白 分離 測定 方法 | ||
1.一種通過液相色譜質譜聯(lián)用測定牛乳清蛋白的方法，它包括以下分離步驟 和測定步驟：
在分離步驟中，對乳清蛋白進行預處理后，用以1.7μm亞乙基橋雜化顆粒為 填料的超高效液相色譜柱對試樣中的牛乳α－乳白蛋白和牛乳βa－乳球蛋白、牛乳 βb－乳球蛋白進行分離；
在測定步驟中，添加人α－乳白蛋白作為內標，用質譜儀進行區(qū)間掃描，對未 變性的上述牛乳白蛋白和牛乳球蛋白進行定量；
所述超高效液相色譜柱為ACQUITY?UPLC?BEH300C18柱；
所述預處理包括用含Triton?X-100的NaCl溶液將樣品溶解后，用含TFA溶液 調節(jié)pH至4.6，定容、均質后離心分離，取上清液用濾膜過濾；
所述超高效液相色譜使用含0.06－0.10％三氟乙酸的水/乙腈溶液作為溶劑和 流動相，進行梯度洗脫；
選用下述質量數(shù)范圍作為牛乳清蛋白定量的掃描區(qū)間：牛α－乳清蛋白為2357 －2368質荷比，牛βb－乳球蛋白為1656－1666質荷比，牛βa－乳球蛋白為1665 －1675質荷比；
采用基質加標法；
對加標基質進行微波處理；
用于人α－乳白蛋白區(qū)間掃描的質量數(shù)范圍為2340－2350質荷比。
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