[發明專利]一種綠茶糖蛋白的質量控制方法

無效

• 申請號: 200910141003.6
• 申請日: 2009-05-09
• 公開（公告）號: CN101625349A
• 公開（公告）日: 2010-01-13
• 發明（設計）人: 周小玲;孫平楠
• 申請（專利權）人: 汕頭大學醫學院;周小玲
• 主分類號: G01N30/86
• 分類號: G01N30/86;G01N30/74
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及天然產物的質量控制領域，具體涉及綠茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的質量控制傅立葉紅外光譜方法。具體講是一種應用數學分析和傅立葉紅外光譜分析技術對綠茶中提取的阿拉伯半乳聚糖蛋白進行有效的質量監控的方法，該方法是通過傅立葉紅外二階導數光譜進行分析獲得構成綠茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的兩種主要單糖組分阿拉伯糖和半乳糖的特征峰；將向量夾角余弦方法應用于綠茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的傅立葉紅外光譜二階導數光譜圖譜的比對，獲得綠茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的傅立葉紅外光譜二階導數光譜圖譜可變區、保守區和相似性，該方法應用于樣品綠茶阿拉伯半乳聚糖蛋白與標準品比對，從而能夠對綠茶阿拉伯半乳聚糖蛋白產品進行有效的質量控制。

背景技術

阿拉伯半乳聚糖蛋白廣泛存在于高等植物中，它對植物細胞的生長發育起到關鍵作用，同時也是很有潛力的人健康免疫調節劑，也有報道其對腸胃潰瘍具保護作用、對血糖血脂有一定的調節作用。阿拉伯半乳聚糖作為可溶性的非粘性膳食纖維已廣泛應用于食品中，易溶于水的特性使其能夠高濃度添加到飲料中而不改變飲料的味道、口感和粘度。它還被用作香料和色素的助懸劑和減緩糖果硬化速度輔助劑。因此，它的理化特性和保健功能使其在食品工業和醫藥工業中具有廣泛的應用前景。從綠茶中提取獲得阿拉伯半乳聚糖蛋白，其分子量在40～150kDa之間，其中蛋白成分約占總質量的10％以下，阿拉伯糖與半乳糖的摩爾比在2∶1～1∶1之間。由于我國的綠茶產量居世界前列，每年的綠茶產品中還包含許多低檔產品以及一些粗老茶以及一部分陳茶，對于如何有效的開發利用這類資源，增加綠茶產品的附加值，從中開發具生物活性的成分尤為重要。

但是，綠茶阿拉伯半乳聚糖蛋白同其它多糖類產品一樣，其質量控制方法是其應用過程中亟待解決的問題。因為，它們的理化性質和生物活性會因為不同的生產工藝、不同的原料來源和組成、分子量分布等因素而發生變化，甚至是很大的改變。如果對其不能進行有效的質量控制，則將極大的限制該類產品的應用和開發。通常，總糖含量被用作控制多糖提取物含量和質量的一個監測指標，但該指標具有很大的局限性，因為它既不能反映多糖組成的變化也不能反映產品活性與組成、結構的關系。

現有的對多糖類產品進行質量控制的方法，有高效液相色譜法監測其分子量和純度、有測定其總糖含量監測其多糖成分所占百分比、有測定其單糖組成成分，但是這些指標在實施起來很難整體全面的反映多糖產品的質量，也不能比較多糖不同批次產品之間的生物學活性差異。其中有些方法操作繁瑣，費時費力，難以適應工業生產應用。

紅外光譜技術被廣泛應用于藥物的化學成分鑒定和結構分析，由于其指紋圖譜性、無損傷性以及可重復性等優點而被許多國家的藥典采納并廣泛應用于藥物鑒定。但現有技術未能用紅外光譜技術對綠茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的進行鑒定和質量控制。

發明內容

本發明的目的在于建立能快速鑒定綠茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的紅外二階導數指紋圖譜的方法。

本發明的另一目的在于將本發明的指紋圖譜結合向量夾角余弦相似度法后應用于綠茶阿拉伯半乳聚糖蛋白產品的質量控制。

本發明采用以下技術方案予以實現：

通過對綠茶阿拉伯半乳聚糖蛋白制備方法，紅外導數圖譜和紅外導數圖譜波數區間的選擇，紅外導數圖譜上對應的組成成分的特征峰的確定，確定了綠茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的傅立葉紅外二階導數指紋圖譜。進一步將此指紋圖譜結合向量夾角余弦相似度法確定該指紋區域中的保守區域和可變區域。這樣該指紋圖譜可以滿足對綠茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的檢測和分析。還進一步將此指紋圖譜結合向量夾角余弦相似度法用于綠茶阿拉伯半乳聚糖蛋白產品的質量控制。

本發明的具體方案如下：

1.綠茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的提取：

綠茶葉45℃烘干后，打磨成粉末后用80％乙醇浸提其中的色素和多酚類物質后，45℃烘干，以1∶20(w/v)料水比75℃，水浸提1h。浸提液經過過濾再400g離心10min，獲得的上清液經冷凍干燥后得到綠茶阿拉伯半乳聚糖蛋白粗品，在陰離子柱Q?Sepharose?Fast?Flowcolumn(20mm×60cm)，pH?8.0下NaCl梯度洗脫，收集第二洗脫峰中主要多糖組分，冷凍干燥后的產品成分主要為綠茶阿拉伯半乳聚糖蛋白。

2.綠茶阿拉伯半乳聚糖蛋白標準品的獲取及鑒定：