[發明專利]定量檢測肌氨酸含量的方法及反應試劑盒

有效

• 申請號: 200910107901.X
• 申請日: 2009-06-05
• 公開（公告）號: CN101587076A
• 公開（公告）日: 2009-11-25
• 發明（設計）人: 楊海朋;戈早川
• 申請（專利權）人: 深圳大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 深圳中一專利商標事務所
• 代理人: 張全文

技術領域

本發明涉及一種定量檢測肌氨酸含量的方法及反應試劑盒，尤其涉及一種 酶催化熒光法定量檢測肌氨酸含量的方法，以及用于該肌氨酸含量檢測方法的 反應試劑盒。

背景技術

目前，測定肌氨酸的含量一般采用液-氣色譜并聯用質譜來進行測定，這種 方法使用的儀器昂貴，且操作復雜，不便于大規模推廣應用。另外，一種臨床 實驗室酶法測定血和尿中肌酐的分光光度法，是利用肌酐在肌酐氨基水解酶、 肌酸脒基水解酶、肌氨酸氧化酶、過氧化物酶等酶和水、氧及顯色劑的共同作 用下生成色原物質，在特定波長下測定色原物質的吸光度，其吸光度值的大小 和樣品中肌酐的含量成正比的原理而設計的，該方法經重新組合后也可以用于 測定肌氨酸含量。但是分光光度法的檢測限比較高，不適用于進行較低濃度肌 氨酸含量的測定。

發明內容

本發明實施例的目的在于提供一種定量檢測肌氨酸含量的方法，旨在解決 現有檢測方法不適用于進行較低濃度肌氨酸含量測定的問題。

本發明實施例的另一目的在于提供一種用于上述檢測肌氨酸含量方法的反 應試劑盒。

本發明實施例的定量檢測肌氨酸含量的方法，包括如下步驟：

S1配制不同濃度的肌氨酸溶液，向溶液中加入堿性緩沖液、肌氨酸氧化酶 催化劑，對甲基酚或對羥基苯乙酸，以及過氧化物酶催化劑，所述堿性緩沖液 將溶液的pH值控制為8～11，所發生的如下化學反應(1)和(2)中肌氨酸、 過氧化氫反應完全：

(1)肌氨酸+氧+水肌氨酸氧化酶過氧化氫+甲醛+甘氨酸；

(2)過氧化氫+對甲基酚過氧化物酶熒光二聚體；或

過氧化氫+對羥基苯乙酸過氧化物酶熒光二聚體；

S2分別測定S1中反應產物熒光二聚體在激發光激發下產生的熒光發射 譜，用熒光發射峰強度數值與肌氨酸的濃度繪制肌氨酸濃度-熒光強度關系曲 線；

S3采用如S1中所述的方法，使未知肌氨酸樣品發生如S1中所述的反應， 測量反應產物的熒光發射譜得到熒光強度數據，對比肌氨酸濃度-熒光強度關系 曲線得出未知肌氨酸樣品含量；

其特征在于：所述S?1和S3中下列反應試劑濃度分別為：

本發明實施例的用于上述定量檢測肌氨酸含量方法的反應試劑盒包含濃度 如下的各組分：

與現有技術相比，上述技術方案由于采用熒光分析法進行定量檢測肌氨酸 含量，一般而言，熒光分析法靈敏度可超過分光光度法二至三個數量級，采用 本發明方法，不僅靈敏度高、檢測限低、重復性好，而且方法快速、簡便，干 擾少，非常適合于復雜樣品(如尿樣或血樣)中微量肌氨酸的大批量分析檢測。 本發明能檢測極低濃度的肌氨酸含量，例如濃度為0.1×10^-9mol/L的肌氨酸溶 液，可以方便快速、靈敏、低成本的測定尿樣或血樣中肌氨酸含量。

附圖說明

圖1是本發明實施例1中熒光二聚體的熒光激發譜；

圖2是本發明實施例1提供的不同濃度肌氨酸溶液的熒光發射譜；

圖3是本發明實施例1提供的熒光峰強度-肌氨酸濃度關系曲線；

圖4是本發明實施例1提供的未知肌氨酸樣品的熒光發射譜。

具體實施方式

為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合實施例， 對本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以 解釋本發明，并不用于限定本發明。

本發明提供一種與現有檢測方法相比，能檢測濃度為0.1×10^-9～1×10^-4mol/L(尿樣或血樣中可能存在的肌氨酸含量范圍)這種低濃度的肌氨酸溶液中 肌氨酸含量的定量檢測方法，當然，該方法也能用于檢測更高含量的肌氨酸溶 液。

該定量檢測肌氨酸含量的方法，包括如下步驟：

S1配制不同濃度的肌氨酸溶液，向溶液中加入堿性緩沖液、肌氨酸氧化酶 催化劑，對甲基酚或對羥基苯乙酸，以及過氧化物酶催化劑，所述堿性緩沖液 將溶液的pH值控制為8～11，所發生的如下化學反應(1)和(2)中肌氨酸、 過氧化氫反應完全：