[發明專利]一種改良的雙抗原夾心免疫檢測法

有效

• 申請號: 200910106053.0
• 申請日: 2009-03-16
• 公開（公告）號: CN101498730A
• 公開（公告）日: 2009-08-05
• 發明（設計）人: 顏文豪;潘少麗;洪娟;彭亮;王寧燕;王榮娥;孫興寶;孫婧;胡鵬
• 申請（專利權）人: 深圳市菲鵬生物股份有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/558
• 代理公司: 暫無信息
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技術領域

本發明涉及免疫檢測領域，具體地說，是涉及一種改良的雙抗原夾心 免疫檢測法。

背景技術

免疫檢測是應用免疫學技術測定標本中待測物質的方法。在臨床檢驗 中主要通過抗原抗體反應檢測體液中的抗體或抗原性物質。根據檢測原理 的不同，免疫檢測可以分為間接法、夾心法(包括雙抗原夾心法和雙抗體 夾心法)、捕獲法、競爭法等。

雙抗原夾心法屬于夾心法的一種，廣泛應用于免疫檢測領域。其基本 原理是：用特異性抗原進行包被和制備標記結合物，通過兩次免疫結合， 形成包被抗原-抗體-標記抗原復合物，完成待測抗體的檢測。根據抗原標 記物及檢測技術的不同，雙抗原夾心法又可進一步具體應用于酶聯免疫 (ELISA)、快速診斷(包括基于膠體金、膠體銀、膠體硒、乳膠等的快速 診斷)、放射免疫、熒光免疫等檢測中。

酶聯免疫的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合 在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體 既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。雙抗原夾心ELISA法，是雙抗原 夾心免疫檢測法在ELISA檢測上面的一個具體應用。在測定時，受檢標本 中的抗體與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方式使固相載體 上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原， 也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢抗體的 量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產 物的量與標本中受檢抗體的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或 定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測 定方法達到很高的敏感度。故雙抗原夾心ELISA法廣泛應用于傳染病等項 目的抗體檢測，具有靈敏度高，特異性好的特點。

快速診斷檢測采用膠體金、膠體銀、膠體硒、乳膠等標記物，利用此 類標記物可以牢固吸附在抗原/抗體的表面而不影響抗原/抗體的活性，當 標記抗體/抗原與待測標本中的抗原/抗體反應聚集到一定濃度時，可以直 接呈現顏色，從而達到快速診斷的效果。快速診斷檢測又可進一步具體為 斑點滲濾法，免疫層析法等。免疫層析法是上世紀九十年代興起的一種基 于免疫膠體金技術的快速診斷技術，其原理是將特異的抗體/抗原先固定于 硝酸纖維膜的某一區帶，當該干燥的硝酸纖維素膜一端浸入樣品后，由于 毛細管作用，樣品將沿著該膜向前移動，當移動至固定有抗體/抗原的區域 時，樣品中相應的抗原/抗體即與該抗體/抗原發生特異性結合，若用免疫 膠體金可使該區域顯示一定的顏色，從而實現特異性的免疫診斷。雙抗原 夾心免疫層析法，是雙抗原夾心免疫檢測法在免疫層析檢測上面的一個具 體應用，此方法檢測待測樣品中的目標抗體，具有迅速便捷的優勢。

化學發光免疫測定(Chemiluminescent?immunoassay，CLIA)是將抗 原與抗體特異性反應與敏感性的化學發光反應相結合而建立的一種免疫檢 測技術。放射免疫測定法將放射性的靈敏度與免疫的特異度相結合，既簡 便準確又靈敏可靠。雙抗原夾心法均可具體應用于這兩種檢測方法。

但是，雙抗原夾心法在具體實施時，常常會由于試劑、材料、環境等 因素，特別是待測樣品中的一些干擾性物質會引起非特異性結合，導致有 一定程度的假陽性，影響了檢測結果的可信度。常規的處理方法就是調低 包被或者標記抗原的用量，提高抗原純度，嚴格控制雙抗原夾心法試劑盒 材料的質量等方面去緩解。但是調低包被或者標記抗原的用量勢必會降低 檢測的靈敏度，提高抗原純度也不可能使抗原純度達到百分之百，試劑盒 材料的質量也不是自己可以隨意可調控的因素。因此雙抗原夾心法檢測目 的抗體時，背景過高以及假陽率高始終是一個難以解決的問題。

為此，必須尋求一種方法來降低雙抗原夾心法的背景和假陽率，提高 檢測的特異性。

發明內容

發明目的：

本發明的目的就是為了提供一種改良的雙抗原夾心免疫檢測法，降低 檢測的背景和假陽率，提高檢測的特異性。

技術方案：

在雙抗原夾心法檢測樣品時，有多種因素可能導致假陽，包括操作員， 待測樣品本身含有的干擾性物質，試劑盒所采用的抗原抗體以及其它輔料 等等因素。在這些因素當中，檢測中由于樣品含有的干擾性物質的非特異 性結合是引起假陽的重要因素。