[發明專利]一種海洋貝類卵細胞石蠟切片方法

有效

• 申請號: 200910101344.0
• 申請日: 2009-07-30
• 公開（公告）號: CN101650273A
• 公開（公告）日: 2010-02-17
• 發明（設計）人: 董迎輝;林志華
• 申請（專利權）人: 浙江萬里學院
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/30;G01N21/84
• 代理公司: 寧波誠源專利事務所有限公司
• 代理人: 袁忠衛

1.一種海洋貝類卵細胞的石蠟切片方法，其特征在于包括下述步驟：

①樣品固定：先用冷的Bouin氏液將樣品固定20-40min，待樣品自然沉降或低速離心后，用吸管除去上清液，至少更換二次Bouin氏液，然后再用Bouin氏液固定5小時后，移入70％酒精中，置4℃冰箱中保存；

②卵細胞預處理：向盛有卵細胞的離心管中加入幾滴1％的伊紅染液，染色1-2分鐘；用細針在稱量紙上刺些小孔，然后用稱量紙將染色后的卵細胞包起來，以使卵細胞在處理時不會漏出；

③脫水與透明程序：將用稱量紙包好的卵細胞置于脫水機或染色缸中，用梯度乙醇脫水；先后采用70％乙醇脫水50分鐘、85％乙醇脫水50分鐘2次、95％乙醇脫水45分鐘2次、100％乙醇脫水45分鐘2次；然后用體積比為1∶1的無水乙醇：二甲苯過渡處理25分鐘，再用二甲苯處理20分鐘2次，使之透明；

④透蠟和包埋：用體積比為1∶1的二甲苯：石蠟過渡處理40分鐘，52～56℃熔點的石蠟透蠟1小時2次；將紙包打開，將卵細胞置于包埋盒中，加注融蠟進行包埋；

⑤切片和烤片：用生物切片機切片，切片厚度5μm，蠟帶用40℃恒溫水浴展片，貼于事先涂有粘片劑的載玻片上，然后在烤片機上烘干；

⑥染色與封片：染色采用伊紅-蘇木精復染方法，其中用蘇木精染色6～8分鐘，伊紅染色1.5～2分鐘；然后用中性樹膠封片。

2.根據權利要求1所述的海洋貝類卵細胞的石蠟切片方法，其特征在于所述的Bouin氏液配方為苦味酸飽和液、甲醛和冰醋酸的混合溶液，三者的體積比冰醋酸∶甲醛∶苦味酸飽和液為1∶5∶15。

3.根據權利要求1所述的海洋貝類卵細胞的石蠟切片方法，其特征在于所述的蘇木精染液配方為：2g蘇木精溶于250mL無水乙醇中，10g硫酸鋁溶于750mL水中，兩液混合，加熱沸騰3分鐘，稍冷卻加入碘酸鈉0.5g，檸檬酸1.0g，溶解后即得到蘇木精染液。

4.根據權利要求1所述的海洋貝類卵細胞的石蠟切片方法，其特征在于所述的伊紅染液為1％的伊紅溶液，用70％乙醇溶解。