[發明專利]一種腦膜炎奈瑟氏菌培養基

有效

• 申請號: 200910094710.4
• 申請日: 2009-07-10
• 公開（公告）號: CN101597582A
• 公開（公告）日: 2009-12-09
• 發明（設計）人: 李映波;戴宗祥;黃秋香;畢湖冰;張麗旌;姬秋彥;劉雅靈;李劍鋒;徐維明
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院醫學生物學研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/36
• 代理公司: 昆明正原專利代理有限責任公司
• 代理人: 徐玲菊

技術領域

本發明涉及一種培養基，尤其是一種適宜腦膜炎奈瑟氏菌較大規模培養的改良培養基，屬于生物技術領域。

技術背景

流行性腦脊髓膜炎，簡稱流腦，是由奈瑟菌屬的腦膜炎奈瑟氏菌所引起的急性呼吸道傳染病。由于發病急，病情發展快，死亡率高，對易感人群——兒童暴發型病死率可達40％～60％，因而一直受到國內外的普遍重視。

雖然對腦膜炎奈瑟氏菌研究甚早，并取得一定成果，但是其培養方面的相關報道很少，且各個廠家對其培養基更是保密。闞方琦等(CN?101089190A)發明了一種營養血液培養基，主要提供一般標本和已使用過抗生素及磺胺藥的病人標本分離培養用，不適合于大規模培養，具有局限性。目前國內外較多應用巧克力雙抗瓊脂作為分離培養基，該培養基的分離檢驗效果很好，但因制作時需使用新鮮脫纖維羊血，具有材料來源不易，造價高，制作過程復雜等缺點，不適宜大規模增菌使用。另外目前的腦膜炎培養基多為分離培養基，其主要目的是分離和檢出，故為了分離檢出，現有培養基要使用抗菌素。

由于腦膜炎奈瑟氏菌對環境的要求非常苛刻，其生長不僅與菌種本身特性有關，如屬專性需氧菌，培養過程中常因菌體產生自溶酶而導致自身裂解死亡，必須賦予合適的培養基才能使其良好生長代謝。因此，完全有必要研制并開發適合工業規模化生產，且材料來源廣，價格低，能避免菌體產生自溶酶的適應腦膜炎奈瑟氏菌生長代謝的培養基。

發明內容

本發明正是為克服現有技術存在的上述不足，提供一種既能保證腦膜炎奈瑟氏菌生長旺盛，進行正常代謝，又能提供大規模增菌以用于生產疫苗的腦膜炎奈瑟氏菌培養基。

本發明通過下列技術方案完成：一種腦膜炎奈瑟氏菌培養基，其特征在于由下列組份組成：

氯化鈉??????3.0～8.0g/L????????氯化鉀????0.05～0.2g/L

磷酸氫二鈉??1.0～6.0g/L????????L-谷氨酸??5～20g/L

L-精氨酸????0.01～0.1g/L???????L-色氨酸??0.001～0.01g/L

L-半胱氨酸??0.005～0.030g/L????氯化鈣????0.01～0.1g/L

硫酸亞鐵????0.001～0.008g/L????硫酸鎂????0.1～1.0g/L

大豆蛋白胨??5.0～20.0g/L???????葡萄糖????5.0～20.0g/L。

本發明提供的培養基通過下列方法制備：

A、將氯化鈉、氯化鉀、磷酸氫二鈉、L-谷氨酸、L-精氨酸、L-半胱氨酸、氯化鈣、硫酸亞鐵、大豆蛋白胨混合物用蒸餾水溶解后，定容，調節pH至7.2-7.4，在113～117℃，0.06～0.08MPa條件下，滅菌15～25min；

B、將L-色氨酸、硫酸鎂、葡萄糖混合物用15mL蒸餾水溶解后，0.2μm一次性濾器過濾除菌后，加入已高壓除菌的A步驟的混合物中，得液體培養基。

本發明提供的培養基具有如下特點：含有腦膜炎奈瑟氏菌生長代謝所需的營養要求，用于大規模擴增已純化的腦膜炎奈瑟氏菌，其中L-谷氨酸是生物體內氮代謝的基本氨基酸之一，腦膜炎奈瑟氏菌不具有還原硫酸鹽能力，故要配入屬還原型硫化物的L-半胱氨酸，L-精氨酸是細菌內鳥氨酸循環的組成成分，具有維持氮平衡的作用；氯化鈣中的鈣離子能促進生長；硫酸鎂中的鎂離子能縮短延滯期；硫酸亞鐵中的鐵離子能影響菌株的毒力并有利于菌落的擴大；葡萄糖有利于腦膜炎奈瑟氏菌的繁殖生長。

本發明與現有技術相比具有下列優點和效果：本發明提供一種可以用于疫苗生產的大規模增菌培養基，所采用的材料和工藝均以疫苗生產為最終目的。采用上述培養基培養腦膜炎奈瑟氏菌，有利于細菌的生長代謝，與其他培養基相比能獲得較高產量，且材料來源廣泛，不含其他動物組織成分，如血清等，可有效排除外源的干擾，在生產上能獲得較高純度的細菌用于疫苗生產，使工藝簡化，易于操作，使用本發明提供的液體培養基進行大規模培養，可有效擴增腦膜炎奈瑟氏菌，獲得純化的細菌以供疫苗生產。

具體實施方式

實施例1

按下列配方備料：

氯化鈉??????5.8g?????氯化鉀????0.09g

磷酸氫二鈉??2.6g?????L-谷氨酸??15.0g

L-精氨酸????0.03g????L-色氨酸??0.0025g

L-半胱氨酸??0.012g???氯化鈣????0.021g

硫酸亞鐵????0.002g???硫酸鎂????0.6g