[發明專利]用于降解黃曲霉毒素B1的粘球菌菌株及其活性蛋白

有效

• 申請號: 200910092920.X
• 申請日: 2009-09-11
• 公開（公告）號: CN101659929A
• 公開（公告）日: 2010-03-03
• 發明（設計）人: 馬秋剛;計成;趙麗紅;關舒;牛天貴
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/52;A23L1/015;C12R1/01
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司
• 代理人: 王朋飛

技術領域

本發明涉及粘球菌，特別是，涉及一種用于降解黃曲霉毒素B1的粘球菌菌株及其活性蛋白。

背景技術

自從1960年黃曲霉毒素被發現以來，科學工作者便不斷地研究該類毒素的預防和去毒方法。目前對黃曲霉毒素解毒方法的研究大部分集中在化學處理法，和物理脫毒法等。傳統的理化方法去毒都存在一些問題，如導致飼料中的營養損失，影響飼料的感官品質，有些方法所需要的設備價格昂貴等等，從而限制了實際生產中的應用。

利用微生物脫毒的報道，多集中在近十年。國內研究不多，只有劉大嶺發現一種真菌代謝產物具有降解毒素的作用。國外的研究報道比較多的集中在乳酸菌，雙歧桿菌，酵母菌和白腐真菌等，還有橙色黃桿菌，紅球菌，假密環菌，根霉菌等的報道。對于乳酸菌，雙歧桿菌和酵母菌的研究表明，大部分去除毒素的效率在50％以下，而且最關鍵的是這種去除機制是可逆的結合，而不是對毒素的降解。其他一些細菌和真菌的解毒研究表明，大部分菌的降解效率不高，降解效率受作用時間，溶液pH值，菌體數量，毒素濃度，金屬離子濃度等影響，還沒有發現一種微生物能完全的不可逆的降解飼料中的黃曲霉毒素。至今為止，還沒有關于粘細菌及其代謝產物降解黃曲霉毒素的報道。

發明內容

本發明的目的是提供一種粘球菌菌株及其活性蛋白，以解決現有技術中存在的上述問題。

本發明提供一種能產生降解黃曲霉毒素B1的活性蛋白的粘球菌菌株Myxococcus?fulvus?ANSM068?CGMCC?No.3194。

本發明還提供一種制備能降解黃曲霉毒素B1的活性蛋白的方法，包括利用上述粘球菌菌株，進行搖瓶發酵，用溶劑提取發酵液中的活性蛋白。

所述搖瓶發酵的培養基包括下述組分：酵母粉5-10g，CaCl₂·2H₂O0.5-1.5g，VB₁₂?0.3-1mg，蒸餾水800-1200mL；pH值為7.0-8.0。優選地，包括酵母粉7g，CaCl₂·2H₂O?1g，VB₁₂?0.75mg，蒸餾水1000mL，pH值為7.5。

所述搖瓶發酵的條件為：發酵溫度為20-35℃，發酵時間30-60h，pH值7.0-8.0，轉速100-200r/min。優選地，所述發酵溫度30℃，發酵時間50h，pH值7.5，轉速160r/min。

搖瓶發酵結束后，過濾掉發酵液中的菌體得上清液，用冰預冷的體積比為95％的乙醇溶液沉淀提取活性蛋白，沉淀時間可為30min。

本發明還提供一種從粘球菌菌株Myxococcus?fulvus?ANSM068CGMCC?No.3194中制備得到的能降解黃曲霉毒素B1的活性蛋白(又稱解毒酶)。

本發明進一步提供降解黃曲霉毒素B1的方法，包括下述步驟：取粘球菌菌株Myxococcus?fulvus?ANSM068CGMCC?No.3194中得到的發酵液或活性蛋白，加入黃曲霉毒素B1溶液，將反應體系調整至pH值為5.0-9.0，在20-40℃反應48-72h后即可去除溶液中的黃曲霉毒素。

優選地，將反應體系調整至pH值7.5，在30℃反應72h后即可去除溶液中的黃曲霉毒素。

上述菌株是以特異性方法篩選得到的橙色粘球菌ANSM068，已于2009年7月17日保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，其簡稱為CGMCC，保藏編號為CGMCC?No.3194。

粘球菌菌株ANSM068具有下述性質：

1)形態特征：營養細胞呈桿狀、兩端尖、細胞略屈；粘孢子球形、有折射性、直徑1.5微米；子實體為橙色球形孢囊、下端收縮、并有一根明顯的柄、不分支；菌落橙色、滑動生長、成薄的擴展菌落群。

2)理化特性：

表1