[發(fā)明專利]一種永生化人肝細(xì)胞系及其制備方法和用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910091343.2
• 申請(qǐng)日: 2009-08-18
• 公開（公告）號(hào): CN101659941A
• 公開（公告）日: 2010-03-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 婁晉寧
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中日友好醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12N5/10
• 分類號(hào): C12N5/10;C12N15/867;A61M1/14;C12Q1/02;C12R1/91
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司
• 代理人: 王德楨

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種永生化人肝細(xì)胞系及其制備方法和該永生化人肝細(xì)胞系在制備生物人工肝和制備治療肝功能衰竭藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

肝移植是治療終末期肝功能衰竭的唯一有效方法。但是，由于肝供體器官來源非常有限，大多數(shù)急性肝功能衰竭的病人往往在等待肝移植供體期間死亡。因此，建立一種生物人工肝支持系統(tǒng)，重建基本的肝臟功能是治療急性肝功能衰竭的一種新技術(shù)，不僅可提高肝衰竭患者的生存率，而且為患者進(jìn)行肝移植贏得時(shí)間。生物人工肝技術(shù)是利用具有部分或全部肝細(xì)胞活性的細(xì)胞裝置在生物反應(yīng)器中，通過該系統(tǒng)中的肝細(xì)胞將患者血漿中的毒性物質(zhì)進(jìn)行代謝，從而起到替代肝臟功能的效果。

生物人工肝中的核心部分是生物反應(yīng)器。生物反應(yīng)器一般由生物活性細(xì)胞和提供生物活性細(xì)胞生長及代謝環(huán)境的支持系統(tǒng)構(gòu)成。生物反應(yīng)器中使用的細(xì)胞性質(zhì)和功能是決定生物人工肝功能效果的主要因素。目前生物反應(yīng)器所使用的生物活性細(xì)胞主要是新鮮的豬肝細(xì)胞(Donato?MT，Castell?JV，Gomez-Lechon?MJ. Characterization?of?drugmetabolizing?activities?in?pig?hepatocytes?for?use?in?bioartificial?live

由于豬肝細(xì)胞的細(xì)胞色素P450含量及混合氧化酶活性與人肝細(xì)胞接近，且具備較好的代謝膽紅素與清除血氨的功能，加之豬細(xì)胞來源廣泛，價(jià)格低廉，因此被應(yīng)用作為生物人工肝的細(xì)胞材料(Donato?MT，Castell?JV，Gomez-Lechon?MJ. Characterization?of?drug?metabolizing?activities?in?pig?hepatocytes?for?use?in?bioartificialliver?de

另一種嘗試用于生物人工肝的細(xì)胞材料是人肝腫瘤細(xì)胞，如低度惡性的肝癌細(xì)胞株，C3A細(xì)胞(Court?FG，Wemyss-Holden?SA，Dennison?AR，Bioartificial?liver?supportdevices：historical?perspectives.ANZ?J?Surg，2003?Sep；73(9)：739-48)。由于這種細(xì)胞存在致瘤性，生物安全性難以充分保證，并且細(xì)胞的生物活性較低，功能上難以令人滿意，故至今未能在生物人工肝制備中廣泛應(yīng)用。

理想的生物人工肝細(xì)胞材料應(yīng)該是人源性、表型正常(非惡性)、容易獲得、具有正常肝細(xì)胞的解毒功能(Hoofnagle?JH，Carithers?RL?Jr，Shapiro?C，et?al.Fulminanthepatic?failure：summary?of?a?workshop.Hepatology，1995；21(1)：240-252)。人的肝細(xì)胞就其生物學(xué)功能及免疫學(xué)特性而言無疑是為最理想的生物人工肝細(xì)胞材料。但由于其來源受到供肝缺乏的限制，而且在體外培養(yǎng)條件下很難增殖。因此，國內(nèi)外技術(shù)人員試圖利用永生化技術(shù)建立人源化肝細(xì)胞系來解決生物人工肝細(xì)胞材料的來源問題。但是，到目前為止，國內(nèi)外所建立的幾種永生化肝細(xì)胞系例如：OUMS29(Kobayashi?N，Noguchi?H，F(xiàn)ujiwara?T，et?al.Establishment?of?a?highly?differentiated?immortalized?adulthuman?hepatoyte?cell?line?by?retroviral?gene?transfer.Transplant?Pro.2000；32(7)：2368-2369)、HepZ(Werner?A，Duvar?S，Muthing?J，et?al.Cultivation?andcharacterization?of?a?new?immortalized?human?hepatocyte?cell?line，HepZ，for?use?in?anartificial?liver?support?system.Ann?N?YAcad?Sci，1999；875：364-368)等都表現(xiàn)出不同程度的肝細(xì)胞功能缺陷，因此還未見有人源化永生化化肝細(xì)胞系應(yīng)用于生物人工肝制備的文獻(xiàn)報(bào)道。