[發明專利]一種合浦珠母貝組織培養方法

無效

• 申請號: 200910087695.0
• 申請日: 2009-07-03
• 公開（公告）號: CN101591639A
• 公開（公告）日: 2009-12-02
• 發明（設計）人: 張榮慶;謝莉萍;李琪;上官俊龍;劉曉軍;周玉娟
• 申請（專利權）人: 清華大學
• 主分類號: C12N5/06
• 分類號: C12N5/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1、一種合浦珠母貝組織培養方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)組織塊取材：取合浦珠母貝，用吸水紙將貝殼表面吸干，用醫用酒精擦拭貝殼表面消毒，剪去閉殼肌側的貝殼邊緣，在無菌操作臺內將閉殼肌割開，取目的組織，將取出的組織浸潤在組織平衡鹽溶液中；

(2)消毒和清洗：用紙片將組織表面的粘液沾去，將組織放入組織消毒液中浸泡，再將組織轉移到組織平衡鹽溶液中，換液，清洗組織表面粘液以及殘余的抗生素；

(3)組織培養：將組織塊剪成小塊，置于預先鋪有鼠尾膠原的組織培養皿中，加入培養基，培養72h后，吸棄0.5ml培養液，補加2ml新鮮的培養液，繼續培養。

2、按照權利要求1所述的培養方法，其特征在于：步驟(1)所述組織平衡鹽溶液，其配方是：NaCl?26.22g/L，KCl?1.08g/L，MgSO₄?2.94g/L，MgCl₂?2.0g/L，CaCl₂?0.664g/L，NaHCO₃0.3g/L，NaH₂PO₄?0.044g/L，glucose?0.30mg/ml，MilliQ水，pH為7.2-7.4，無菌濾膜過濾后使用。

3、按照權利要求1所述的培養方法，其特征在于：步驟(2)所述消毒液，其配方是：青霉素100萬IU/L，鏈霉素1g/L，慶大霉素80萬IU/L，甲硝唑15mg/L，制霉菌素2mg/L溶解于組織平衡鹽溶液中，無菌濾膜過濾后。

4、按照權利要求1所述的培養方法，其特征在于：步驟(3)所述培養基，其配方是：：199培養基(Medium?199)和L-15培養基(Leibovitz-15?medium)粉末分別溶于500ml滅過菌的MilliQ水中，室溫攪拌至完全溶解，再將兩種培養基1∶1混合，加入10.22g/L?NaCl，40μg/ml抗壞血酸維生素C，128.9μg/ml牛磺酸，10μg/ml?ATP，400μg/ml乳蛋白水解物，67mg/ml?HEPES，再加入以下抗生素：100?IU/ml青霉素，100μg/ml鏈霉素，50μg/ml卡那霉素和1μg/ml制霉菌素，攪拌，pH調至7.0，無菌條件下過濾，加入10％胎牛血清和10％雞胚浸液。