[發明專利]一種利用細菌發酵生產丙烯酸的方法

無效

• 申請號: 200910084913.5
• 申請日: 2009-05-27
• 公開（公告）號: CN101555496A
• 公開（公告）日: 2009-10-14
• 發明（設計）人: 袁其朋;李晶
• 申請（專利權）人: 北京化工大學
• 主分類號: C12P7/40
• 分類號: C12P7/40;C12R1/01
• 代理公司: 北京思海天達知識產權代理有限公司
• 代理人: 劉 萍

1、一種利用細菌發酵生產丙烯酸的方法，它包括如下步驟：

(1)菌株選擇：埃氏巨球形菌，中國微生物菌種保藏管理委員會保藏，保藏號為CGMCC，No1.2720；

(2)斜面培養：麥芽汁液體培養基：麥芽汁體積百分濃度為7％，pH自然，滅菌121.3℃，20分鐘；將上述篩選出的菌株，無菌條件下用接種環接1～2環于麥芽汁液體培養基33～40℃恒溫培養8～24小時；

(3)一級種子培養：將步驟(2)培養的菌株，無菌條件下用接種環接1～2環于發酵培養基中，33～40℃條件下，在搖床上振蕩培養24～48小時，制得一級種子；

(4)擴大培養：按體積比10％的接種量，接一級種子于發酵培養基中，添加四種體積百分濃度為0.015％～0.150％的電子受體水溶液之一，33～40℃條件下，在搖床上振蕩培養24～96小時，制得二級發酵液；所添加的四種電子受體分別為：亞甲基藍、聯苯醌、甲萘醌和蒽醌，

(5)收集菌體：取步驟(4)的發酵液，在80，000～10，000轉/分條件下離心15-20分鐘，收集沉淀菌體，并用質量百分濃度為0.7％的氯化鈉溶液洗滌2～3次，濕菌體在4℃儲存，備用；

(6)丙烯酸的提取：選用氯仿萃取法進行菌體內丙烯酸的提取：將菌體用蒸餾水重懸，超聲波破碎后，離心得粗丙烯酸溶液，之后按體積比為1∶1的比例加入三氯甲烷，45℃震蕩萃取4小時，靜置分層，取下層即為丙烯酸樣品。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于步驟(3)中涉及的液體發酵培養基配方是：牛肉粉2.4g/L，蛋白胨10.0g/L，酵母膏5.0g/L，Na₂HPO₄4.0g/L，葡萄糖1.5g/L，可溶性淀粉0.5g/L，L-半胱氨酸-HCl·H₂O?0.5g/L，其他為去離子水；此液體發酵培養基除L-半胱氨酸-HCl·H₂O外，均121.3℃，pH7.5，滅菌20分鐘；L-半胱氨酸-HCl·H₂O用0.22um微孔濾膜過濾除菌。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于步驟(4)中涉及的發酵培養基：KH₂PO₄0.5g/L，NH₄Cl?0.5g/L，MgCl₂·6H₂O?0.5g/L，可溶性淀粉20.0g/L，葡萄糖13.0g/L，酵母膏4.0g/L，巰基乙酸；此發酵培養基除巰基乙酸外均121.3℃，pH7.5，滅菌20min；巰基乙酸0.22um微孔濾膜過濾除菌。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于步驟(4)中所述的培養溫度是37℃，培養時間是96小時；添加濃度為0.015％。