[發(fā)明專(zhuān)利]與衰老相關(guān)退行性疾病的線粒體ND3基因SNP G10310A分子標(biāo)記、檢測(cè)方法及試劑盒無(wú)效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 200910082377.5 | 申請(qǐng)日： | 2009-04-15 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN101532058A | 公開(kāi)（公告）日： | 2009-09-16 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 楊澤;馮潔;孔放;張建佚;陳靜;萬(wàn)鋼;齊科研;唐雷 | 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人： | 衛(wèi)生部北京醫(yī)院 |
| 主分類(lèi)號(hào)： | C12Q1/68 | 分類(lèi)號(hào)： | C12Q1/68;C12N15/12;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京北新智誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 | 代理人： | 程鳳儒 |
| 地址： | 10073*** | 國(guó)省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 衰老 相關(guān) 退行 性疾病 線粒體 nd3 基因 snp g10310a 分子 標(biāo)記 檢測(cè) 方法 | ||
1、一種與衰老相關(guān)的退行性疾病線粒體ND3基因SNP?G10310A分子標(biāo)記，其特征在于，DNA序列如SEQ?ID?No.1所示。
2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的與衰老相關(guān)的退行性疾病線粒體ND3基因SNP?G10310A分子標(biāo)記，其特征在于，所述SEQ?ID?No.1中第10310位點(diǎn)存在一個(gè)分子標(biāo)記SNPG10310A。
3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的與衰老相關(guān)的退行性疾病線粒體ND3基因SNP?G10310A分子標(biāo)記，其特征在于，所述SEQ?ID?No.1的第10310位點(diǎn)為G或A。
4、一種檢測(cè)權(quán)利要求2所述的線粒體ND3基因SNP?G10310A分子標(biāo)記的方法，其特征在于，其具體步驟如下：
(1)提取基因組DNA；
(2)線粒體ND3基因單核苷酸多態(tài)性識(shí)別：
制備混合液：步驟(1)制備的基因組DNA溶液、PCR緩沖液、dNTP、Taq?DNA聚合酶、PCR引物、PLUS+飽和熒光染料、寡核苷酸探針和純水；
PCR條件：在95℃?5分鐘，95℃?1分鐘，63.5℃?30秒，72℃?10秒，72℃?7分鐘，進(jìn)行35個(gè)循環(huán)；反應(yīng)完成后，將PCR產(chǎn)物再進(jìn)行兩個(gè)變性和復(fù)性的循環(huán)，95℃變性30秒，25℃復(fù)性2分鐘，共2個(gè)循環(huán)；
(3)將步驟(2)制備的樣本進(jìn)行高分辨熔解曲線分析。
5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種檢測(cè)權(quán)利要求2所述的線粒體ND3基因SNP?G10310A分子標(biāo)記的方法，其特征在于，所述PCR引物為：
堿基序列如SEQ?ID?No.2所示：
F1：5’-ATTTGATCTAGAAATTGCCCTCC-3’；
堿基序列如SEQ?ID?No.3所示的：
R1：5’-TTGTAGTCACTCATAGGCCAG-3’。
6、一種檢測(cè)權(quán)利要求2所述的線粒體ND3基因SNP?G10310A分子標(biāo)記的特異性引物，其特征在于，其長(zhǎng)度為21～23bp，堿基序列如SEQ?ID?No.2所示的：
F1：5’-ATTTGATCTAGAAATTGCCCTCC-3’；
堿基序列如SEQ?ID?No.3所示的：
R1：5’-TTGTAGTCACTCATAGGCCAG-3’。
7、根據(jù)權(quán)利要求6所述的特異性引物，其特征在于，所述的特異性引物可以擴(kuò)增出含有mtDNA10310位點(diǎn)的ND3基因序列。
8、一種檢測(cè)權(quán)利要求2所述的線粒體ND3基因SNP?G10310A分子標(biāo)記的試劑盒，其特征在于，該試劑盒由以下試劑組成：
(1)130ul純水；
(2)20ul?10X?PCR緩沖液；
(3)4ul?10mM?dNTP混合液；
(4)20ul?1unit/ul?Taq?DNA聚合酶；
(5)2ul?1pmol/ul?F1引物；
(6)2ul?10pmol/ul?R1引物；
(7)20ul?1XLCGreen?PLUS+飽和熒光染料，
(8)探針：2ul?10pmol/ul?C1；
其中引物F1堿基序列如SEQ?ID?No.2所示，R1如SEQ?ID?No.3所示；探針C1堿基序列如SEQ?ID?No.4所示。
9、權(quán)利要求8所述的檢測(cè)線粒體ND3基因SNP?G10310A分子標(biāo)記的試劑盒用于預(yù)測(cè)衰老相關(guān)的退行性疾病的應(yīng)用。
10、根據(jù)權(quán)利要求9所述的檢測(cè)線粒體ND3基因SNP?G10310A分子標(biāo)記的試劑盒的應(yīng)用，其特征在于，所述衰老相關(guān)的退行性疾病為：中風(fēng)、心血管疾病、2型糖尿病、帕金森病和/或老年性癡呆。
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